[发明专利]自动蛋白杂交洗脱仪

说明书

一、技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，特别涉及一种自动蛋白杂交洗脱仪。

二、背景技术

现有技术：蛋白杂交(Western blot)是现代生命科学领域经常使用的一种实验技术，即将目的蛋白行电泳分开后转移到PVDF膜上，再与已知的蛋白配体(如抗体等)杂交，通过酶系统显色后检测目的蛋白的有无和定量。它包括封闭、杂交和洗脱三个过程，其中封闭和杂交过程可合称孵育过程。目前，蛋白杂交常规的做法是摇床法，即将电泳转膜后的PVDF膜放于玻璃平皿中，然后将平皿放置在脱色摇床上。用含牛血清白蛋白(BSA)或脱脂奶粉的封闭液慢速摇动封闭，然后用含抗体的孵育液慢速摇动孵育。用洗脱液快速摇动洗脱4-6次，每次5-10分钟。如果使用酶标的二抗，应在含抗靶蛋白的一抗孵育液孵育并洗脱后，换含酶标抗第一抗体的二抗孵育液慢速摇动孵育。用洗脱液快速摇动洗脱4-6次，每次5-10分钟。最后用DAB或化学发光法显色以检测目的蛋白的有无和定量。常规做法的缺点是：1.费时费力，操作烦琐；2.抗体量较少时不便于实验；3.不便于规模化操作。

三、发明内容

本发明针对上述技术问题，提供一种操作简单，在抗体量少时也不影响结果，能够做到规模化大批量蛋白杂交的自动蛋白杂交洗脱仪。

本发明的技术解决方案为：一种自动蛋白杂交洗脱仪，由孵洗系统、进样系统、出样系统和动力系统组成，其中孵洗系统包括溶液筒和转轴，转轴设于溶液筒内；进样系统包括进液管、恒流泵和试剂容器，进液管一端与溶液筒上部相连，另一端通过恒流泵与试剂容器相连；出样系统包括出液管H、出液管L、开关和废液收集器，出液管H和出液管L的一端分别与溶液筒下部相连，另一端与废液收集器相连，开关设于出液管上；动力系统包括电动机、调速开关和电源，电动机由调速开关控制，并与转轴相连。孵洗系统可与若干进样系统连接。溶液筒上分设有进膜口和出膜口。溶液筒可与4根进液管相连。转轴上设有膜固定装置，膜固定装置上设有磁膜夹和膜片托。将电泳转膜后的PVDF膜用胶带固定在一个可以旋转的转轴上，将转轴放于溶液筒内，通过进样系统将封闭液加入到溶液筒内，转轴以2-10转/分钟的低速旋转封闭。通过出样系统将封闭液放出，然后通过进样系统将抗体溶液加入到溶液筒内，转轴以2-10转/分钟的低速旋转孵育。孵育完毕后将抗体溶液通过出样系统放出，然后通过进样系统将洗脱液持续地加入到溶液筒内，转轴以100-200转/分钟的高速旋转洗脱。当加入的洗脱液达到出液管H的顶端时，多余的洗脱液由出液管H排到废液瓶中，这样新的洗脱液不断进入，多余的洗脱液不断排出，从而实现了连续洗脱。连续洗脱省去了常规方法中不断更换洗脱液的步骤，节省了时间和人力。由于转轴和溶液筒之间的空隙腔可以很小，因此可以在抗体量较少的情况下进行实验，节省了抗体。同一转轴可平行附贴多张PVDF膜，从而可以实现规模操作。孵育和洗脱的过程便于控制，实验条件保持一致，所以结果的重复性好。转动孵育的方法可以增加抗原抗体接触的机会，因此可以提高了杂交效率。结合自动控制系统，可以实现自动封闭孵育和洗脱，从而实现实验自动。本蛋白杂交洗脱仪包含四个系统，即进样系统、动力系统、出样系统和孵洗系统。进样系统包括进液管、恒流泵和试剂瓶三部分。试剂瓶是盛装封闭液、抗体溶液和洗液的容器，一个试剂瓶盛装一种溶液。在恒流泵的推动下，溶液经由进液管进入到溶液筒和转轴之间的空隙腔中。动力系统包括电源、电动机和调速开关三部分。调速开关可以调节电动机的转速，孵育时电动机转速较低，洗脱时电动机转速较高。电动机和孵洗系统的转轴相连，从而带动转轴转动。出样系统包括出液管H、出液管L、开关和废液瓶四部分。孵育时溶液液面低于出液管H的顶端，出液管L的开关处于关闭状态；洗脱时溶液液面与出液管H的顶端相平，出液管L的开关处于关闭状态，同时进液系统处于工作状态；排放废液时打开出液管L的开关，废液由出液管L排到废液瓶中。孵洗系统包括溶液筒和转轴两部分。PVDF膜通过胶带固定在转轴上。溶液筒是一个外部的容器，内容纳着转轴。