[发明专利]一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法无效
申请号: | 200710133146.3 | 申请日: | 2007-09-30 |
公开(公告)号: | CN101139382A | 公开(公告)日: | 2008-03-12 |
发明(设计)人: | 蔡宇杰;金大勇;许善峰;丁彦蕊;孙俊;廖祥儒;戴士俊;张大兵 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C07K5/08 | 分类号: | C07K5/08;C07K1/16 |
代理公司: | 无锡市大为专利商标事务所 | 代理人: | 时旭丹;刘品超 |
地址: | 214122江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 模拟 移动 色谱 分离 纯化 发酵 谷胱甘肽 方法 | ||
技术领域
一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法,属于生物制品加工技术领域。
背景技术
谷胱甘肽(GSH)在生物体内有着多种重要的生理功能,特别是对于维持生物体内适宜的氧化还原环境起着至关重要的作用。自从谷胱甘肽被发现以来,它不仅作为试剂广泛用于生物化学、医学、生物学和化学的研究测定中,而且已成为一种重要的生化药物。
近年来在我国科技人员的努力下,我国发酵法生产谷胱甘肽的上游技术也取得长足进步,基本达到了工业化水平。然而谷胱甘肽发酵过程中的副产物众多且化学性质相近、分离困难。目前国内外谷胱甘肽的分离提取几乎都使用离子交换树脂技术。分离过程的产物纯度和回收率较低,限制了我国谷胱甘肽的工业化生产。
目前,传统的谷胱甘肽分离方法制取的成品中谷胱甘肽含量低,杂质多,成本十分昂贵,而且产生较大的污染。发酵法生产谷胱甘肽得以工业化生产还依赖于谷胱甘肽分离提取技术。
关于由发酵液中分离提取谷胱甘肽的报道较少,Takeshi Gotoh等研究了电渗析法发酵液中谷胱甘肽的分离(Takeshi Gotoh,Ken-ichi Kikuchi,Contaminationof anion-exchange membrane by glutathione,Biosenaration 9:3741.2000)。Kimura申报了一种采用离子交换法从大肠杆菌发酵液中提取谷胱甘肽的方法(Kimura,Akira,Murata,Kousaku,Mutant strain of Escherichia coli and its use for thepreparation of glutathione,United States Patent 4,598,046,July 1,1986)。国内也有一些谷胱甘肽提取方面的报道,王辉等对几种国产树脂谷胱甘肽的分离性能进行了测定(王辉,冯万祥,几种国产树脂对谷胱甘肽的分离性能的测定,离子交换与吸附,1997,13(3),318-321),结果显示大空型及交联度较小的树脂分离效果好。卓肇文等报道了用铜盐法提纯谷胱甘肽的工艺(卓肇文,周金鑫,刘树魁.用改进的方法从酵母制取还原型谷胱甘肽.氨基酸杂志,1988,3:6-9),但是这种方法步骤复杂,污染环境。邱雁临等研究了金属螯合亲和层析和离子交换法分离纯化谷胱甘肽。谭天伟等提出了一种谷胱甘肽纯化分离方法,选择了含有-S-R基团或-S-S-R基团的分离介质分离谷胱甘肽(专利公开号:CN1807447A)。王淼等提出一种采用谷胱甘肽发酵液离心得酵母细胞、调节pH值、沸水破壁方法,提取细胞中的谷胱甘肽的方法,但谷胱甘肽的纯度较低(专利公开号:CN1850854A)。
先前我们也提出了四区模拟移动分离谷胱甘肽的技术,取得了较好的效果.本发明进一步提出了一种五区模拟移动床色谱分离谷胱甘肽的方法,可极大地提高谷胱甘肽的纯度及产率。
发明内容
本发明的目的在于:提供一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法。采用五区模拟移动床色谱分离谷胱甘肽可实现连续化生产,在保证产品纯度的条件下,达到较高的回收率和生产强度,并有效地减少对环境的污染。
本发明的技术方案:一种五区模拟移动床色谱法分离纯化发酵液中谷胱甘肽的方法,步骤如下:
a、将谷胱甘肽酵母发酵液,采用过滤和超滤处理去除菌体、蛋白质和多糖杂质;
b、将超滤后的发酵液通过活性炭脱色;
c、将脱色后的谷胱甘肽发酵液通过50℃真空减压浓缩至原体积的20%、降温至10℃结晶除盐得发酵液粗提物,控制谷胱甘肽质量浓度为5%-40%;
d、采用装填有阳离子交换树脂的五区模拟移动床分离纯化谷胱甘肽发酵液粗提物,
采用装填有阳离子交换树脂的模拟移动床系统分离谷胱甘肽发酵液粗提物的进样液,采用0.1-0.5M NaOH水溶液作为洗脱液,控制模拟移动床各功能区的流动相流速和柱切换时间,将谷胱甘肽和杂质分离,从提取液出口2处收集得到谷胱甘肽,从提取液出口1和提余液出口处得到杂质。
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