[发明专利]一种新的基于LC/MS－IT－TOF的中药注射剂复杂成分分析方法

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，涉及中药注射剂的成分分析与质量控制，特别是涉及脉络宁注射液的复杂成分分析方法。

背景技术

中药注射剂是当代中药剂型的突破性创新，具有生物利用度高、作用迅速等特点，能较好地发挥中药治疗急病重症的作用，在临床实践中显示出良好的、甚至化学药物无法达到的治疗效果。中药注射剂的研究和发展，对于我国中医药事业的发展有着极其重要的意义。但由于中药的成分极为复杂，且长期以来受基础研究不够深入的影响，目前绝大多数中药注射剂的成分组成并不是很清楚，在建立质控标准时，一部分品种仅采用紫外分光光度法测定其中某类成分的总含量，分析方法专属性差；而另一部分品种也只是对个别指标性成分或有效成分进行定量测定。很显然，这种质控方法不符合中药多组份多靶点效应的作用特点，质量控制标准不能切实反应中药注射剂的安全性、有效性，导致中药注射剂在质量、临床疗效和使用安全性方面存在很多问题，以致部分医务工作者对使用中药注射剂心存疑虑。

质量标准要求低是目前中药注射剂的突出问题。由于临床使用的中药注射剂中大部分产品是上世纪70年代至80年代初研究开发的品种，受当时历史条件的限制，物质基础研究薄弱，检测手段落后，质量标准要求低。后来虽经整顿和提高，一些品种确实建立了较高的质量标准，但是大部分品种的质量标准仍然要求过低。2000年，原国家药品监督管理局颁发了《加强中药注射剂质量管理》，提出中药注射剂要建立指纹图谱检测标准。2000年8月颁发了《中药指纹图谱研究技术指导原则(试行)》。中药指纹图谱是中药注射剂质量标准重要组成部分，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。但由于中药注射剂成分复杂，且很多是未知成分，而中药指纹图谱只是进行相似度比较，很少对其化学成分进行结构鉴定，“知其然而不知其所以然”，以现行中药指纹图谱技术所建立中药注射剂质量控制标准，并不能切实反映中药注射剂的安全性和有效性。阐明中药注射剂的主要化学成分构成是今后研究发展的必然趋势和要求。

近年来，国内外均开始重视中药成分的结构鉴定与物质基础研究，所运用的分析技术手段主要包括HPLC-UV和多种液/气质联用技术等。但总体来说，目前的研究方法还存在一些不足：(1)多数研究只是针对某一药材的某一主要组分群(如水溶性酚类成分)或是某一药材的主要成分，而不是着眼于全方。(2)多数研究只是对有标准对照品的化学成分进行选择性鉴定，而不是总体鉴定，对缺少标准品的化学成分，难以得出比较确定的鉴定结果。(3)目前多数液/气质联用技术难以同时获得多级碎裂结构信息和精确质量测定(精确到0.0001Da)。(4)目前尚缺乏一种高灵敏度、高分辨的具有普遍适用性的中药复杂成分分析与结构鉴定方法。

高效液相-离子阱飞行时间质谱仪(LC/MS-IT-TOF)是岛津公司最新推出的高端质谱仪，是目前唯一的连接离子阱和飞行时间质谱的串级质谱技术，同时具备了高分辨率、高质量精确度、高速检测等特点，能够提供丰富、精确的化合物结构信息，对于中药复杂成分分析与结构鉴定具有突出的优势。

鉴于此，本发明应用LC/MS-IT-TOF的高分辨率、高质量精确度、高速检测技术建立了一种快速分析中药注射剂复杂成分的方法，对于中药注射剂的质量控制具有重要的意义和普遍适用性。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的基于LC/MS-IT-TOF高分辨率、高质量精确度、高速检测技术的中药注射剂复杂成分分析与结构鉴定方法，通过如下步骤完成：

1、采用一定方法对中药注射剂进行全成分提取：

既要尽可能多的提取主要成分，又要尽量去除辅料干扰，根据中药注射液自身特性选择适宜的提取方法。提取方法通常包括液液萃取、固相萃取、过滤等，其中液液萃取溶剂包括正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、苯、正己烷、环己烷等，固相萃取可以根据实际情况选择不同填料的固相小柱，过滤则根据实际情况选择不同型号、孔径的滤膜、滤纸。

2、应用LC/MS-IT-TOF，在一定色谱质谱条件下，进行正负离子全扫描得到总离子流色谱图：