[发明专利]一种简单高效地制备CIK细胞的方法无效
申请号: | 200710133833.5 | 申请日: | 2007-10-23 |
公开(公告)号: | CN101418283A | 公开(公告)日: | 2009-04-29 |
发明(设计)人: | 周曙明;范云峰 | 申请(专利权)人: | 范云峰 |
主分类号: | C12N5/08 | 分类号: | C12N5/08 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 213300江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 简单 高效 制备 cik 细胞 方法 | ||
1.一种简单高效地制备CIK细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1).从新采的O型健康献血者的白细胞成分血中分离外周血单个核细胞,离心,清洗沉淀细胞;
2).用含植物血凝素(PHA)和γ干扰素(IFN-γ)的无血清BIOTARGET-1培养基将细胞稀释后培养24小时,加入抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和白细胞介素-2(IL-2)继续培养3天;
3).根据细胞的生长状况每2-3天补加含IL-2的新鲜培养基。
4).多次传代培养,获得高扩增倍数的CIK细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,外周血单个核细胞来源于血站O型健康献血者新采的全血经成分血分离后的残液(该残液富含白细胞)。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,清洗沉淀细胞所用的溶液为医用生理盐水。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,无血清培养基为不含各种血清的BIOTARGET-1培养基。
5.根据权利要求1和权利要求4所述的方法,其特征在于,Ficoll液分离获得的外周血单个核细胞先用含100ng/ml PHA和1000U/ml IFN-γ的无血清培养基稀释至2×106个/ml后培养24小时左右。
6.根据权利要求1和权利要求5所述的方法,其特征在于,培养体系在添加CD3McAb和IL-2之前无需对悬浮的细胞进行离心沉淀和清洗。
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