[发明专利]一种简单高效地制备CIK细胞的方法无效

专利信息
申请号: 200710133833.5 申请日: 2007-10-23
公开(公告)号: CN101418283A 公开(公告)日: 2009-04-29
发明(设计)人: 周曙明;范云峰 申请(专利权)人: 范云峰
主分类号: C12N5/08 分类号: C12N5/08
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 213300江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 简单 高效 制备 cik 细胞 方法
【权利要求书】:

1.一种简单高效地制备CIK细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1).从新采的O型健康献血者的白细胞成分血中分离外周血单个核细胞,离心,清洗沉淀细胞;

2).用含植物血凝素(PHA)和γ干扰素(IFN-γ)的无血清BIOTARGET-1培养基将细胞稀释后培养24小时,加入抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和白细胞介素-2(IL-2)继续培养3天;

3).根据细胞的生长状况每2-3天补加含IL-2的新鲜培养基。

4).多次传代培养,获得高扩增倍数的CIK细胞。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,外周血单个核细胞来源于血站O型健康献血者新采的全血经成分血分离后的残液(该残液富含白细胞)。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,清洗沉淀细胞所用的溶液为医用生理盐水。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,无血清培养基为不含各种血清的BIOTARGET-1培养基。

5.根据权利要求1和权利要求4所述的方法,其特征在于,Ficoll液分离获得的外周血单个核细胞先用含100ng/ml PHA和1000U/ml IFN-γ的无血清培养基稀释至2×106个/ml后培养24小时左右。

6.根据权利要求1和权利要求5所述的方法,其特征在于,培养体系在添加CD3McAb和IL-2之前无需对悬浮的细胞进行离心沉淀和清洗。

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