[发明专利]抑制肿瘤和白血病细胞VEGF表达和增殖的siRNA及应用

说明书

本发明专利申请是申请号为“2005100350025”的分案申请，原申请的申请日为“2005年6月3日”，申请号为“2005100350025”，发明名称为“抑制肿瘤和白血病细胞VEGF表达和增殖的siRNA及应用”。

技术领域

本发明属于分子生物学与生物医药技术领域，具体为抑制VEGF蛋白表达和增殖的siRNA序列及应用。

背景技术

RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默(Post-transcriptional genesilencing，PTGS)，在此情况下启动子是活跃的，靶基因能被转录，但不能正常积累mRNA。各种体内外实验证实21-23个nt的短双链RNA，即siRNA(shortinterference RNA，siRNA)，可在哺乳动物细胞组织内引起基因封闭作用，其结构稳定，无须象反义核苷酸那样进行广泛的化学修饰以提高其半衰期，并能在低于反义核苷酸几个数量级的浓度下，使靶基因降至极低水平甚至完全“敲除”，从而产生缺失突变表型。siRNA的干预效应关键取决于其靶基因序列的选择，任一nt的错误均会导致RNAi效应的丧失，这种高度序列特异性使其对点突变、序列插入和缺失的选择性基因静寂有很重要的药理作用。已证明，siRNA技术可单独或与其它现有的治疗手段一同用于突变所致的疾病，如病毒感染、脊髓延髓肌肉萎缩症(SBMA)，还可用于治疗肿瘤。

血管内皮生长因子(VEGF)通过促进内皮细胞的增殖、生存和迁移而刺激血管的生成，在胚胎生成、骨骼的生长以及生殖活动中是一种生理性血管生成的关键调节因子，在肿瘤的血管生成中发挥着关键作用。在各种肿瘤和白血病细胞中，都已经发现VEGF表达上调，而且它与肿瘤和白血病的进展和预后差密切相关。

肝癌作为实体瘤，其发生、发展与肿瘤血管生成有着密切的联系。VEGF在肝癌中高表达，与肝癌的分期、分级以及预后密切相关。将VEGF作为RNA干扰的靶标，利用VEGFsiRNA阻断VEGF及其受体的信号转导途径，从而阻断VEGF促血管形成，达到抑制肝癌细胞增殖的目的。因此，通过干扰VEGFmRNA，阻断血管形成，抑制肿瘤的生长、复发和转移已经成为肿瘤治疗的一种新策略。

发明内容

本发明的目的在于提供能在细胞和蛋白水平上抑制肝癌和白血病细胞株VEGF表达的siRNA以及提供该siRNA在制药中的应用。

为达上述目的，发明人采用siRNA设计法则并结合RNAstructure3.7软件辅助设计VEGFsiRNA序列，通过实验筛选以下9条高效VEGFsiRNA序列(见表1)：

表1  9条高效VEGFsiRNA序列