[发明专利]新MHC II相关肽

说明书

本发明涉及结合人MHCII类HLA-DR分子的新肿瘤抗原肽的鉴别。本发明涉及树突细胞对这样的肿瘤抗原肽在与肿瘤细胞结合后的呈递。而且，本发明还涉及这样的肿瘤抗原肽用于疫苗接种抵抗肿瘤和用于诊断对肿瘤的免疫应答的应用。

通过表达肿瘤特异性蛋白可将肿瘤细胞与健康细胞区别开。这些在肿瘤中新表达的、突变的或异常表达的蛋白可以用作诊断标记或用于疗法。

一类有效地用作诊断和治疗工具的标记是结合主要组织相容性复合体(MHC)分子的蛋白片段或肽。在人类中，MHC分子被定义为人白细胞抗原(HLA)。HLA相关肽较短，包含9-25个氨基酸(Kropshofer，H.&Vogt，A.B.，Immunol Today 18(1997)77-82)。它们对于起动适应性免疫反应是必不可少的，因为它们激活特异化的免疫细胞，即T淋巴细胞(简称：T细胞)。如果T细胞不能识别出来自肿瘤特异性抗原的肽，则会造成免疫逃避和肿瘤的渐进性生长(Boon，T.等，Ann Rev Immunol.12(1994)337-265)。

关于它们的功能，可以区别开两类MHC-肽复合体(Germain，R.，Cell76(1994)287-299)：(i)MHC I类-肽复合体可以由几乎所有的有核细胞表达，以吸引CD8+细胞毒性T细胞，它会溶解肿瘤细胞和受感染细胞，(ii)MHC II类-肽复合体仅在所谓的抗原呈递细胞(APC)上组成型表达，例如B淋巴细胞、巨嗜细胞或树突细胞(DC)。具体地，DC具有准备CD4+T辅助细胞的能力(Banchereau，J.和Steinman，R.M.，Nature 392(1998)245-254)。而且，DC会被允许最佳地激活细胞毒性CD8+T细胞：这是通过它们的MHC II类-肽复合体与CD4+T辅助细胞的预先相互作用来完成的(Ridge，T.等，Nature 393(1998)474-478)。这样，MHC II类分子呈递到DC上的肽在涉及T细胞驱动的免疫反应的疾病的发病机理中、从而也在诱导抗肿瘤的免疫中起主导作用。

DC在启动免疫反应中的明显作用已经促使人们尝试将DC开发作为疫苗，特别是抗癌症的疫苗(Dallal，R.M.和Lotze，M.T.，Curr OpinionImmunol 12(2000)583-588)。一项重要的进展是发明了用于体外分化不同来源(包括外周血，例如粘附的单核细胞或来自骨髓的CD34+干细胞前体)的DC的技术。体外分化和活化的DC在与来自肿瘤细胞的抗原共培养或者采用类似技术以后，可以用于癌症患者的疫苗接种。实验性的树突细胞疫苗接种研究已经成功地诱导了特异性的抗癌反应，包括临床反应(Timmermann，J.M.和Levy，R.，Ann Rev Medicine 50(1999)507-529；Nestle，F.O.，等，Nature Medicine 7(2001)761-765)。

基于鉴别肿瘤抗原的疫苗包括用裸DNA准备的DC、重组的腺病毒或痘苗病毒、从各肿瘤细胞纯化出的天然或重组蛋白或合成的肿瘤肽类似物。用抗原性肿瘤肽而不是遗传的或蛋白前体来刺激DC的优点是，肽可以直接装载在DC的MHC分子上，而无需其它加工。

在过去的十年中，已经鉴别出了许多源自肿瘤标记蛋白且被MHCI类分子限制的肽。它们被分成4类：睾丸癌抗原，黑素瘤-黑素细胞分化抗原，在肿瘤上过表达的突变的抗原和未突变的共有抗原。在几个临床实验性的疫苗接种研究中，用黑素瘤肽的混合物刺激来自黑素瘤患者的DC，该肽至今仍然受到HLA I类的排他性的限制(Nestle，F.O.等，NatureMedicine 4(1998)328-332；Thurner，B.等，J Exp Med 190(1999)1669-1678)。但是，越来越多的证据表明，通过补充MHC II类限制的协助T细胞可以增加抗肿瘤的细胞毒性T细胞反应的功效和寿命。因此，预计一种改良的疫苗接种方法是组合使用除MHC I类抗原之外的MHC II类相关的肿瘤肽。

对CD4+T辅助细胞识别的MHC II类-限制的癌症抗原的知识落后于对I类-限制的抗原的鉴别(Wang，R.-F.，Trends in Immunol 22(2001)269-276)。一个原因是，将来自肿瘤细胞的cDNA库转染进靶细胞后使用抗肿瘤T细胞鉴别合适的转染子和抗原性的表位(一种成功地应用于MHCI类分子的方法)是无效的，因为编码的蛋白不能运送到APC中的MHC II类途径。