[发明专利]表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒毒株、其构建方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组杆状病毒毒株构建方法，尤其涉及一种猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达及应用；本发明还涉及用于构建该猪圆环病毒2型重组毒株的重组表达载体以及该重组毒株在猪圆环病毒诊断、预防中的应用，属于兽医生物技术领域。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multsystemic wasting syndrome，PMWS)的病原，引起断奶仔猪发生进行性消瘦、咳嗽、呼吸困难、腹泻、皮肤苍白或黄染、淋巴结肿大、肾脏灰白水肿等症状(Allan G M，Ellis J A.Porcine circoviruses：A review[J].J Vet Diagn Invest，2000，12：3-14)。本病于1991年在加拿大首次被发现，现已证实呈世界性流行，我国的一些猪场也普遍存在本病。PCV2基因组含有2个主要阅读框架，即ORF1和ORF2。PCV2-ORF1由945个碱基组成，编码314个氨基酸，基因产物与病毒复制酶相关(Rep)；PCV2-ORF2由702个碱基组成，编码233个氨基酸，是构成病毒衣壳蛋白(Cap)成分(Cheung A K.Transcriptional analysis ofporcine circovirus type 2[J].Virology，2003，305：168-180；Hamel A L，LinL L，Nayar G P S.Nucleotide sequence of porcine circovirus associated withpostweaning multisystemic wasting syndrome in pigs[J].J Viol，1998，72：5262-5267.)。Nawagitgul等(Nawagitgul P，Morozov I，Bolin S R，et al.Openreading frame 2 of porcine circovirus type 2 encodes a major capsidprotein[J].J Gen Virol，2000，81：2281-2287；Nawagitgul P，Harms P A，MorozovI，et al.Modified indirect porcine circovirus(PCV)type 2-based andrecombinant capsid protein(ORF2)-based enzyme-linked immunosorbent assaysfor detection of antibodies to PCV[J].Clin Diagn Lab Immunol，2002，9：33-40.)。用杆状病毒表达了PCV2-ORF2基因获得30kDa蛋白产物，电镜下观察这种产物具有自我装配假病毒颗粒的能力。由于该病毒感染细胞不呈现细胞病变，病毒培养物毒价低、不易纯化，给研究工作带来一定困难。昆虫杆状病毒表达系统以其表达外源蛋白产量高、抗原性好、产物易纯化等特点，在多种疫病的研究中得到广泛利用。

发明内容

本发明目的是提供一种重组杆状病毒毒株，该重组毒株可以表达PCV2-ORF2编码的Cap蛋白，所表达的重组蛋白具有良好的免疫活性，可作为猪圆环病毒2型亚单位疫苗，也可作为猪圆环病毒2型特异性抗体诊断抗原。

本发明目的是通过以下技术方案来实现的：

一种重组杆状病毒毒株(rBac/PCV2Cap)，其微生物保藏号是：CGMCC NO.2083；分类命名是：表达猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2)Cap蛋白的重组杆状病毒；保藏时间是：2007年6月13日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所。