[发明专利]细胞因子白介素15生物活性测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞因子的生物活性测定方法，更具体地说涉及IL-15生物活性测定方法。

背景技术

Grabstein等首先在猴肾表皮细胞系CV-1/EBVA上清中发现一种能维持CTLL增殖的因子，随后基因克隆获得成功并命名为白细胞介素15(interleukin 15，IL-15)。而后在多种人体组织和细胞中发现IL-15表达。IL-15具有类似IL-2的结构和功能，刺激CTLL细胞和PHA活化T细胞(CD4+CD8+亚群)的增殖，诱导CTL和LAK细胞的产生。IL-15的刺激作用需要有靶细胞的IL-2受体β和γ链的参与，但不需要IL-2受体的a链。

有文献报道使用IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞作为检测细胞株，检测重组IL-15的活性(孙汭，田志刚，魏海明等.重组人白细胞介素15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达.中国生化药物杂志，2000，21(4)：163-165.)。我们利用CTLL-2细胞株对IL-15的反应性，运用MTT方法，建立对重组IL-15的活性的检测方法。同时，在测活方法建立过程中，考察不同的影响因素，包括样品浓度范围、稀释方式、测活细胞数、血清浓度、样品反应时间等。目前，经过一系列试验，我们已摸索出适合rhIL-15测活的技术参数，并已形成相应的活性测定标准操作规程。

由于rhIL-15目前尚无活性标准品及活性单位，在建立活性方法的过程中，我们自制了一批标准品，最后确定以ED₅₀稀释度的倒数为1AU。

发明内容

本发明的目的是提供一种新颖的，准确性高，方便实用、成本低廉的人白介素15细胞因子生物活性的测定方法。

本发明的目的是提供用于该方法的细胞及其培养方法。

在本发明的第一方面，提供了一种细胞因子IL-15的生物活性测定方法，其步骤包括：

(1)在合适的培养条件下，培养合适的检测用细胞；

(2)加入IL-15与细胞共同培养；

(3)检测细胞活性；

在本发明的一优选例中，所述的合适的细胞为IL-2依赖细胞株CTLL-2。

在本发明的一优选例中，所述的步骤(1)的培养条件包括：

细胞在含有10％胎牛血清、1000IU/ml重组人白介素-2的RPMI1640培养基(完全培养基)内培养，培养条件37℃，5％CO₂的培养箱；细胞悬浮生长，隔天更换10％胎牛血清的培养基。

在本发明的一优选例中，所述的步骤(2)的培养条件包括：

37℃，5％二氧化碳孵箱，培养18～24小时。

附图说明

无。

具体实施方式

本发明采用IL-2依赖细胞株CTLL-2作为测活细胞株，通过改良细胞培养方法：控制包括细胞接种密度、细胞饥饿时间、样品加入方法，并采用MTT法进行检测，最后在570nm处进行比色，采用吸光值测定IL-15对IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞的促增殖和分裂作用。在确定方法的同时，我们对其进行了方法验证，以确定它的准确度、精确度等相关因素。

一、CTLL-2细胞的培养

试剂要求：

1、RPMI1640培养液：