[发明专利]人角质细胞生长因子－2活性测定的方法

权利要求书

1.一种人角质细胞生长因子-2生物活性测定方法，其步骤包括：(a)用改良方法培养NIH3T3细胞株；(b)细胞接种；(c)细胞饥饿处理；(d)加入人角质细胞生长因子-2进行检测。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(a)中所用培养基配方和配制方法如下：

(A)HEPES 7.2克；碳酸氢钠1克；L-谷胺酰胺0.4克；DMEM粉末(低糖)2包；用纯化水溶解，定容至2L；

(B)Ph值小于7.0；溶解条件：室温；

(C)试剂完全溶解后，无菌过滤，再分装在500ml的培养瓶中，取出其中的一瓶放置4℃备用，其余均放置在-20℃保存；

(D)PS均进行无菌分装-20℃保存，使用基础培养液时再按照比例加：PS 1∶100。

3.如权利要求1所述的方法，步骤(b)中细胞接种密度控制在(6000-8000个/孔)范围内。

4.如权利要求1所述的方法，步骤(c)中细胞饥饿时间在20-26hr。

5.如权利要求1所述的方法，其步骤(D)特征为：在24孔板内将样品2倍梯度的稀释，取出细胞板内残留饥饿液后，将梯度稀释后的样品加入细胞板内，72小时以内，加入加入MTT显色反应5小时，取出参与的培养基，加入DMSO溶解结晶，570NM比色。