[发明专利]突变乙酰乳酸合酶和用于产生支链L-氨基酸的方法

权利要求书

1.一种细菌乙酰乳酸合酶AHAS I的突变小亚基，其由大肠杆菌的野生 型乙酰乳酸合酶小亚基的氨基酸序列组成，所述小亚基的突变是：

A)将所述野生型乙酰乳酸合酶小亚基中SEQ ID NO：2的位置17的L- 氨基酸用赖氨酸取代或SEQ ID NO：2的位置30的L-氨基酸用脯氨酸取代， 或

B)将所述野生型乙酰乳酸合酶小亚基中从SEQ ID NO：2的位置44的 L-氨基酸至C-末端部分的L-氨基酸全部缺失，并用二肽精氨酸-苯丙氨酸替 换，所得的氨基酸序列具有总共45个氨基酸残基，

而且其中包含所述突变小亚基的突变乙酰乳酸合酶对缬氨酸的反馈抑制 脱敏。

2.根据权利要求1的细菌乙酰乳酸合酶的突变小亚基，其中用赖氨酸残 基取代的位置17的所述L-氨基酸是天冬酰胺。

3.根据权利要求1的细菌乙酰乳酸合酶的突变小亚基，其中用脯氨酸残 基取代的位置30的所述L-氨基酸是丙氨酸。

4.根据权利要求1的细菌乙酰乳酸合酶的突变小亚基，其中所述位置44 的L-氨基酸在所述突变之前是异亮氨酸。

5.一种突变乙酰乳酸合酶，包含根据权利要求1的小亚基。

6.根据权利要求5的突变乙酰乳酸合酶，其中所述突变乙酰乳酸合酶包 含大肠杆菌大亚基。

7.一种DNA，其编码根据权利要求1的乙酰乳酸合酶的突变小亚基。

8.一种肠杆菌科的细菌，所述细菌包含根据权利要求7的DNA并且具 有产生支链L-氨基酸的能力。

9.根据权利要求8的细菌，其中所述支链L-氨基酸选自下组：L-亮氨酸、 L-异亮氨酸和L-缬氨酸。

10.根据权利要求9的细菌，其中将突变乙酰乳酸合酶的活性增强。

11.根据权利要求10的细菌，其中细菌属于埃希氏菌属。

12.根据权利要求11的细菌，其中通过增加突变乙酰乳酸合酶基因的表 达来增强突变乙酰乳酸合酶的活性。

13.根据权利要求12的细菌，其中通过选自下组的方法来增加突变乙酰 乳酸合酶的活性：

a)增加突变乙酰乳酸合酶基因的拷贝数，

b)修饰所述基因的表达控制序列以使基因的表达增强，和

c)它们的组合。

14.根据权利要求13的细菌，其中通过将突变乙酰乳酸合酶基因的多拷 贝整合到细菌的染色体中来增加拷贝数。

15.一种用于产生支链L-氨基酸的方法，其包括在培养基中培养根据权 利要求8的细菌，和从培养基中收集支链L-氨基酸。

16.根据权利要求15的方法，其中细菌具有涉及支链L-氨基酸生物合成 的基因，所述基因的表达增强。

17.根据权利要求16的方法，其中所述支链L-氨基酸选自下组：L-亮氨 酸、L-异亮氨酸和L-缬氨酸。