[发明专利]半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记及其分析方法

权利要求书

1.一种半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记，其特征在于：是根据目标表达序列标签设计固定引物，以CACGC为核心序列设计随机引物，通过反转录聚合酶链式反应而得到特定表达序列标签多态性。

2.根据权利要求1所述的半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记，其特征在于：所述的固定引物的序列如下：

E1：5’ATTCAGCCGATTGCAAGAGA 3’/CV171606

E2：5’TATCTTGACCAGGCGAGACCT 3’/CV171904。

3.根据权利要求1所述的半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记，其特征在于：所述的随机引物的序列如下：

C1：5’GACTGCGTACGCACGCTGA 3’

C2：5’GACTGCGTACGCACGCTGA 3’

C3：5’GACTGCGTACGCACGC AAC3’。

4.一种如权利要求1所述的半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记的分析方法，其特征在于：分析方法包括以下步骤：

(1).确定目标EST；

(2).在基因库的EST库查询目标EST序列；

(3).根据目标EST序列设计固定引物和随机引物；

(4).合成引物：应用DNA合成仪合成设计好的固定引物和随机引物引物；

(5).RNA的提取；

(6).RT-PCR扩增：应用oligod(T)做引物，对RNA进行反转录合成cDNA，

应用固定引物和随机引物，对cDNA进行PCR扩增；

(7).扩增产物的检测：PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；数据分析：

银染以显示扩增条带，应用数据分析软件进行分析。

5.根据权利要求4所述的半定量表达序列标签扩增多态性的分子标记的分析方法，其特征在于：所述的随机引物和固定引物的组合为：

C1/E1，C1/E2；C2/E1；C2/E2，C3/E1，C3/E2。