[发明专利]99Tcm－His10－AnnexinV标记化合物的标记技术和作为显像剂在检测细胞凋亡方面的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物的放射性核素标记技术，以及该放射性核素标记化合物的应用，

特别涉及⁹⁹Tc^m-His10-AnnexinV标记化合物作为显像剂的应用。

背景技术

细胞凋亡(apoptosis)是一种高度保守的细胞程序性死亡(PCD)，在诸多生理和病理过程中起着重要的作用。过度凋亡会使组织功能丧失，如急性心肌梗死、慢性心力衰竭、移植排斥反应、中风、神经系统变性疾病等。相反，系统性红斑狼疮及类风湿关节炎以凋亡不充分为特征，使免疫细胞大量存活而不恰当地杀死和破坏正常组织，使组织脏器功能受损。凋亡抑制导致细胞过度增殖和肿瘤形成，许多化疗药物多是通过诱导凋亡来实现治疗目的的。

但目前常规的细胞凋亡检测方法还不能满足基础研究和临床实践的需要，已有的实验室检测手段只能从细胞形态学和生化改变方面进行体外的定性和定量分析，如电镜观察、流式细胞分析、DNA降解条带分析和相关蛋白表达水平检测等。在活体条件下观察细胞凋亡范围、时相和发展速度等，一直是研究的一大难题。特别是在心血管系统疾病的研究中，活体标本采集尤为困难，因此活体显像显得更为必要。

近年来，国内外已开展有关细胞凋亡放射性核素显像的研究，研究的关键是合成能与凋亡细胞特异结合的显像剂，且物理化学特性适于放射性核素标记，并具有血液清除快，靶器官显像清晰等特点。放射性核素标记磷脂结合蛋白V(Annexin V)是目前最受关注的细胞凋亡显像剂之一。

Annexin V是一种人体内源性蛋白，属于Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白家族，最早是从胎盘中分离出来，具有一些抗凝固及抗炎的作用，曾被作为一种抗凝剂研究。染色体定位分析显示，Annexin V是由位于人的第4条染色体4q26-q28上的Annexin V基因编码，含有319个氨基酸，包括个70-80氨基酸重复单元，分子量约为35kD。研究证实，Annexin V能与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异性结合，正常细胞的PS位于细胞膜内层，凋亡时表达在细胞膜外层，是细胞凋亡的特征性标志，Annexin V与PS的亲和力高达10^-9mol/L。

Annexin V类显像剂的合成关键是放射性核素的标记，既要获得较高的放射化学纯度，同时又不能损伤Annexin V的结合活性。目前研究最成功的是⁹⁹Tc^m标记的Annexin V(⁹⁹Tc^m-AnnexinV)。放射性核素⁹⁹Tc^m具有优良的物理性质，十分适合目前的显像仪器，且获取容易，价格低廉。

⁹⁹Tc^m标记的方法可分为双功能鳌合剂法和直接还原法。双功能鳌合剂法选择连接剂非常重要，既要保证与⁹⁹Tc^m有很高的配位能力，又要保证不改变其原有生物活性。常用的有二硫二氮(N₂S₂)、乙二胺半胱氨酸(EC)、BTAP等，其中以肼基烟酰胺(Hynic)最为多见。目前，多数临床前研究采用Hynic为螯合剂进行⁹⁹Tc^m标记Annexin V，得到的⁹⁹Tc^m-Hynic-Annexin V比活度较高，放射性化学纯度大于90％，并且已经在凋亡动物模型中获得良好的评估，被认为是监控肿瘤治疗疗效潜在的有效的放射性药物。但双功能鳌合剂法过程比较复杂，对技术条件要求严格，制备成本高。