[发明专利]一种确立参与卵巢癌肿瘤发生学的蛋白的研究方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗评价、检测技术领域，特别地，涉及一种确立参与卵巢癌肿瘤发生学的蛋白的研究方法。

背景技术

据美国2000年报道，约有80％的卵巢癌病人发现在中晚期，其五年生存率仅为35％。反之，在早期发现的病人中，则五年的生存率超过90％，其中许多病人仅通过外科手术便获得治愈。因此，提高该病的早期诊断率，对于降低卵巢癌病人的死亡率和治疗费用，具有直接地作用。应用新技术检测卵巢癌，对于提高妇女健康水平具有重要作用。特别是对于卵巢癌高危人群，如有家族或个人肿瘤史、有肿瘤易感基因BRCA1和BRCA2突变的妇女更为急迫，但目前对于这部分人群尚无有效的筛查方法。因此需要寻找特异性更强和灵敏度更高的肿瘤分子标记物。目前最普遍使用的卵巢癌生物标记物是肿瘤抗原CA125，尽管80％的晚期卵巢癌病人CA125浓度不正常，但是仅有50-60％的早期卵巢癌病人CA125浓度增高。CA125单独作为标记物的阳性预测值不到10％，加上超声检查，阳性预测值增加至20％。低分子量的血清蛋白质波谱可能反映组织的病理状态，并有助于肿瘤早期检测。生物质谱SELDI-TOF能够获得此范围的蛋白质波谱。这些波谱包含上千个数据点。生物信息学已经用于研究生理学的结果和基因芯片，但是对于血清蛋白质的复杂质谱图中未能分析出的变化，则需要更高等级的数据分析系统。利用SELDI-TOF蛋白质芯片系统，可分析病人血清蛋白质波谱变化，确立参与卵巢癌肿瘤发生学的蛋白，并且可用于肿瘤早期诊断。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种确立参与卵巢癌肿瘤发生学的蛋白的研究方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种确立参与卵巢肿瘤发生学的蛋白的研究方法：

(1)别取上皮性卵巢癌标本和交界性卵巢肿瘤标本；

(2)激光捕获微切割：从同一上皮性卵巢癌标本中分离出癌细胞和相对正常细胞，从同一交界性卵巢肿瘤标本中分离出交界性肿瘤细胞和相对正常上皮细胞；

(3)细胞裂解：将步骤(2)中分离出的细胞分别置入细胞裂解液中，离心除去细胞碎片；

(4)应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱蛋白质芯片技术分析上皮性卵巢癌细胞和相对正常细胞、交界性卵巢肿瘤细胞和相对正常上皮细胞，寻找蛋白质谱的差异点；

(5)数据分析：将原始数据用平移不变小波变换，去除噪音，并减掉基线，分别用支持向量机方法建立判别模型，用留一法交叉验证作为评估模型判别效果的方法，建立的模型和留一法交叉验证的结果作为最终的结果。

本发明相对于现有技术，具有如下技术效果：

(1)本发明采用激光捕获微切割技术和表面加强激光解析电离化飞行时间质谱蛋白质芯片技术，高精准、高通量、低丰度；

(2)该两项技术的结合在肿瘤学包括妇科肿瘤学的研究中具有广阔的应用前景，为研究者对卵巢癌的诊断、鉴别及治疗提供了新的分子生物学证据。

附图说明

图1为本发明的方法流程图。

具体实施方式

下面根据附图和实施例详细说明本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。

本发明所提供的用于确立参与卵巢癌肿瘤发生学的蛋白的方法的步骤为：

1.获取标本：取上皮性卵巢癌标本和交界性卵巢肿瘤标本，保存在冰箱待测(-70℃--80℃)。

2.激光捕获微切割：从上皮性卵巢癌标本中分离出癌细胞和相对正常细胞，从交界性卵巢肿瘤标本中分离出交界性肿瘤细胞和相对正常上皮细胞；

(1)切片准备：冰冻组织包埋，5-8mm冰冻切片后贮存在冰箱待用(-70℃--80℃)；

(2)切割前，切片立刻解冻，70％酒精固定5s，苏木素染色8s，苏木素-伊红染色，70％、95％、100％酒精脱水1.5m，每步脱水后二甲苯2m，然后空气中风干。70％酒精和苏木素中添加小型蛋白酶抑制剂。

(3)激光微切割：采用德国莱卡公司激光微切割机器。每次切割时间少于30m防止蛋白降解。～1×10⁴细胞数，贮存在冰箱待测(-70℃--80℃)。

3.细胞裂解：将微切割后的细胞分别置入6μL细胞裂解液中4℃20分钟，后离心除去细胞碎片，贮存待用。