[发明专利]一种用于联合检测已婚女性妊娠和肝病的蛋白芯片

说明书

技术领域

本发明涉及医学诊断装置技术领域，尤其涉及一种用于联合检测已婚女性妊娠和肝病的蛋白芯片及其制备与应用技术。

背景技术

乙型肝炎是一种全身性病毒感染性疾病。一旦患病，治疗十分困难。因此，怀孕妇女发现被乙型肝炎感染或携带乙型肝炎病毒后，应及早流产。因为感染乙肝的孕妇继续妊娠，不仅会加重病情，而且可传染给胎儿，影响胎儿正常生长发育，造成畸形、死胎。更重要的是，乙肝患者容易病情恶化，最终转化成肝癌病人。因此，开展已婚年轻女性妊娠和肝病的联合检测能达到对胎儿健康程度的早期评价。

现有临床对已婚女性进行妊娠和肝病诊断的方法主要有：酶联免疫吸附实验、放射免疫检测法、金标免疫检测法、分子生物学方法、影像学手段等。免疫学手段在对妊娠和肝病进行检测时，只能对单个指标逐一进行检测，这样就存在费时、费力、费钱等缺点，往往忽略了疾病隐患，这对于怀孕女性中胎儿健康造成了潜在威胁；而目前分子生物学检测手段，如PCR方法，在对于乙肝病毒的检测中往往存在假阳性，造成误诊；超声波和核磁共振等物理方法往往会对胎儿造成不利的影响。

目前，蛋白芯片作为一种较新的检测技术已在多种肝炎的联合诊断检测，如乙肝和丙肝蛋白检测芯片、以及多种肿瘤联合检测中有相关的报道，虽然该技术能够达到高通量、平行化的检测特点，但往往出现特异性较差、交叉反应等问题。

发明内容

本发明目的是，针对上述现有技术所存在的特异性较差、易交叉反应等缺陷，提供一种灵敏度高、特异性强，能够快速、准确检测已婚女性是否怀孕，有否感染乙肝病毒及乙肝有否向肝癌转化等问题，以使孕妇和胎儿的健康程度及早进行联合检测与评估的蛋白芯片及其制备与应用技术。

本发明目的通过下述技术方案得以实现：

一种用于联合检测已婚女性妊娠和肝病的蛋白芯片，该芯片包括固相载体和设置在固相载体上的腔室；所述固相载体为硝酸纤维素膜，所述腔室内点阵有抗AFP(alhpa-fetoprotein，甲胎蛋白)、抗Beta-HCG(Human chorionicgonadotropin，人绒毛膜促性腺激素β亚单位)和抗HBsAg(hepatitis B surfaceantigen，乙型肝炎表面抗原)三种抗体，点阵后以10％BSA进行封闭即成。

一种用于联合检测已婚女性妊娠和肝病蛋白芯片的制备方法，该方法按以下步骤进行：

(1)硝酸纤维素膜的氨基化处理、压穴形成腔室；

(2)利用芯片点样仪把平均浓度为0.8mg/mL的抗AFP(alhpa-fetoprotein，甲胎蛋白)、抗Beta-HCG(Human chorionic gonadotropin，人绒毛膜促性腺激素β亚单位)和抗HBsAg(hepatitis B surface antigen，乙型肝炎表面抗原)三种抗体，点阵于步骤(1)的同一腔室内；

(3)将步骤(2)点阵于同一腔室内的三种抗体，以10％BSA进行封闭，经晾干后置于4℃冰箱内保存，即成蛋白芯片成品。

一种利用蛋白芯片联合检测已婚女性妊娠和肝病的方法，该方法按以下步骤进行：

(1)将保存于4℃冰箱内的蛋白芯片启封、待用；

(2)血清制备：早晨空腹采集已婚女性外周血，离心分离待检血清，置4℃冰箱保存，待用；

(3)血样检测：将步骤(2)待检血清加入步骤(1)的蛋白芯片腔室中，在37℃孵育30min，使血清中的抗原与固定在芯片上的相应抗体发生特异性结合后，以T-TBS漂洗；加入荧光物HRP标记的抗AFP、抗Beta-HCG和抗HBsAg三种抗体，在37℃孵育30min，以T-TBS漂洗；最后加入Femto底物显色，以T-TBS漂洗；

(4)结果评判：依据蛋白芯片样品中显色强度与待检血清中三种不同抗原含量各成正相关的原理，采用专业的芯片阅读仪进行读数和分析，依此作出评判结果。

本发明的有益效果是：

(1)本发明蛋白芯片与其他检测技术相比较具有灵敏度高、特异性强等优点，对抗Beta-HCG的灵敏度达3ng/ml，对抗HBsAg的检测灵敏度达7ng/ml，对抗AFP检测灵敏度达20ng/ml。

(2)本发明应用方法操作简捷，每次约需半小时、价格适宜，每次约30元，方便，仅需抽一次血即可准确地完成对已婚女性是否妊娠、是否乙肝感染及是否向肝癌转化的一次性检测，从而快速实现对胎儿健康程度的早期评估。

附图说明

图1.三种抗体在蛋白芯片同一腔室内的点阵排列图；