[发明专利]粘性沙雷氏菌及其生物转化DL－乳酸生产丙酮酸

权利要求书

1.粘性沙雷氏菌ZJB-07166(Serratia marcescens ZJB-07166)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2007年9月7日，保藏编号CCTCCNo：M207140。

2.如权利要求1所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166，其特征在于所述粘性沙雷氏菌ZJB-07166具有如下特征：

菌落形态：在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落呈圆形，四周光滑，表面湿润，中央微凸起，深红色；

细胞形态：短杆状，个体细胞大小为(0.5-0.8)×(0.9-1.4)μm，无芽孢生成，能运动；

生理生化特征：革兰氏染色呈阴性、氧化酶呈阴性、过氧化氢酶呈阳性、鸟氨酸脱羧酶呈阳性、精氨酸双水解酶呈阴性、赖氨酸脱羧酶呈阳性、脲酶呈阴性、L-阿拉伯糖呈阴性、5-酮基-葡萄糖酸钠呈阳性、脂肪酶呈阳性、酚红反应呈阴性、β-葡萄糖苷酶呈阳性、D-甘露醇呈阳性、D-麦芽糖呈阳性、侧金盏花醇呈阳性、帕拉金糖呈阴性、β-葡萄糖酸酶呈阴性、丙二酸盐呈阴性、N-乙酰-β-葡萄糖苷酶呈阴性、β-半乳糖苷酶呈阳性、D-葡萄糖呈阳性、D-蔗糖呈阳性、L-树胶醛糖呈阴性、D-阿拉伯糖呈阴性、α-半乳糖苷酶呈阴性、D-海藻糖呈阳性、L-鼠李糖呈阴性、肌醇呈阳性、D-纤维二糖呈阴性、D-山梨醇呈阳性、α-麦芽糖甙酶呈阴性。

3.如权利要求1所述的粘性沙雷氏菌ZJB-07166在微生物转化DL-乳酸制备丙酮酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为，以DL-乳酸为底物，以粘性沙雷氏菌ZJB-07166湿菌体为生物催化剂，在转化体系溶液中，在20-50℃下转化反应6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，分离纯化得到丙酮酸，所述转化体系溶液为蒸馏水、自来水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述底物DL-乳酸的浓度为10mM-140mM。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的湿菌体添加量为2-40g/L。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的应用以粘性沙雷氏菌ZJB-07166进行种子培养和菌体培养，从培养液中离心得到的湿菌体作为生物催化剂，在EDTA溶液存在下，以蒸馏水溶液为转化液，所述湿菌体添加量为2-40g/L，EDTA浓度为5-20mM，控制转化温度为20-50℃，进行微生物转化反应6-10小时，反应完全得含酸丙酮酸的转化液，经分离制得丙酮酸。

8.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下步骤制备得到：

(1)种子培养：将粘性沙雷氏菌ZJB-07166接种于斜面培养基在20-30℃的条件下培养24-36小时，获得斜面活化菌种，所述斜面培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，酵母粉1-8g/L，蛋白胨1-8g/L，琼脂15g/L-20g/L，溶剂为水，初始pH为6.0-7.5；再将斜面活化菌种接种于种子培养基，在20-35℃，100-200r/min条件下培养24-36小时得种子液，所述种子培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，溶剂为水，初始PH为6.0-7.5；

(2)菌体培养：菌体培养基中按照体积比接入1-5％的种子液，在20-35℃，摇床转速100-200r/min条件下培养24-56小时，将培养液离心、洗涤，收集湿菌体，冷藏备用；所述的菌体培养基组份为：DL-乳酸钠2-15g/L，磷酸二氢钾0.2-2g/L，磷酸氢二钾0.2-2g/L，氯化铵1-6g/L，0.0001-0.005g/L MgSO₄·7H₂O，溶剂为蒸馏水，初始PH为6.0-7.5。

9.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的转化体系初始pH为6.59.0，在20-40℃摇床150r/min水浴中进行转化。

10.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的应用为：以粘性沙雷氏菌ZJB-07166的湿菌体为生物催化剂，在初始pH为6.5-9.0，底物DL-乳酸浓度为10mM-140mM，湿菌体浓度为2-40g/L，EDTA浓度为6-14mM条件下，在28-32℃，摇床转速50-250r/min震荡，转化6-10小时，得含有丙酮酸的转化液，再用SD-4型弱碱性离子交换树脂分离纯化得到丙酮酸。