[发明专利]阴道加德纳菌的选择性培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种阴道加德纳菌的选择性培养基及其制备方法。

背景技术

阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis，GV)是女性细菌性阴道炎(Bacterial Vaginosis，BV)最常见病原体，性接触传播疾病的病原菌之一，自1955年由Gardner与Dukes从非特异性阴道炎患者的标本中分离出该菌株以来，国内外不断有该菌引起的泌尿生殖系统感染的报道。目前，由于阴道加德纳菌营养要求较高，首次分离需要提供CO₂或无氧环境，给实验室常规分离带来困难，为此，国内开展阴道加德纳菌培养的医院并不多，不利于阴道病的治疗。

培养基组分是人为提供给微生物的最重要的培养环境，是影响微生物生长繁殖和代谢产物合成的重要因素。

目前所用的培养基：国外(1)阴道琼脂培养基：BBL公司的哥伦比亚基础培养基中，加入1％蛋白胨，高压灭菌后加入5％人血。(2)鉴别培养基：Difco公司戈司曼培养基中，加际蛋白胨，高压灭菌后加入萘啶酸30mg/L，多粘菌素B 20mg/L，新霉素40mg/L。

国内：(1)分离培养基：牛肉汤100ml，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，吐温80 0.02ml，琼脂1.2g，混合溶解调pH7.3，121℃ 20min灭菌。冷至50℃时，加入新鲜人血5ml。(2)改良人血哥伦比亚选择性培养基：取哥伦比亚琼脂19.5g，多蛋胨2.5g，10g/L胶木浸膏溶于450ml蒸馏水，加热溶解调整pH为7.0～7.4.高压灭菌，冷却至50℃左右加入无菌人血30ml、组合抑菌剂一瓶(含庆大霉素2.0mg、二性霉素B 1.0mg、萘啶酮酸15.0mg)混匀倾注平板。

国外(1)阴道琼脂培养基和国内(1)分离培养基共同的缺点是没有加细菌和霉菌的抑菌剂，由于阴道分泌物中有大量的杂菌，且生长较快，培养过程中与加德纳菌争夺营养，致使加德纳菌生长不佳而不易分离。

国外(2)鉴别培养基和国内(2)改良人血哥伦比亚选择性培养基，虽培养基配方有所改进，但由于庆大霉素、萘啶酮酸对阴道加德纳菌有抑制作用；庆大霉素对阴道加德纳菌的敏感率为80.4％。本发明过程中65株加德纳菌药敏试验结果庆大霉素敏感率为32.3％，喹诺酮类如环丙沙星敏感率为38.5％。因此不利于加德纳菌的生长。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的在于提供了一种阴道加德纳菌的选择性培养基及其制备方法，具有能有效的将加德纳菌从革兰阳性的葡萄球菌、链球菌、革兰阳性杆菌及各种霉菌中分离出来，从而快速对加德纳菌进行检测，该培养基具备营养丰富、价格低廉、配制方便的优点。

为达到上述的目的，本发明采用如下技术方案，

一种阴道加德纳菌的选择性培养基，配制1000ml培养基的配方如下：

营养肉汤粉15-20g；

哥伦比亚琼脂35-44g；

吐温80 0.2-0.4ml

革兰染色1液(结晶紫液)0.05-0.075ml；

5氟胞嘧啶0.02-0.03g；

人血50-80ml；

血浆30-50ml；

蒸馏水加至1000ml。

所述的配制1000ml培养基的优选配方如下：

营养肉汤粉18g；

哥伦比亚琼脂39g；

吐温80 0.3ml

革兰染色1液(结晶紫液)0.05-0.075ml；

5氟胞嘧啶0.03g；

人血50ml；

血浆50ml；

蒸馏水加至1000ml。

所述的阴道加德纳菌的选择性培养基的制备方法，包括以下步骤：

(1)将营养肉汤，哥伦比亚琼脂，吐温80，革兰染色1液(结晶紫液)，蒸馏水加的一起搅拌，并在121℃高压灭菌20min。

(2)冷却到45～50℃，然后加入5氟胞嘧啶，人血，血浆摇匀，将培养基倒入平板中，冷却后倒置放于4～8℃冰霜中备用，保存时间不能超过3周。

使用时，只需要将阴道分泌物涂布于该培养养基上，置含5％～10％CO₂环境35℃～37℃培养24～48小时，加德纳菌形成菌落为0.5～0.8mm，淡紫色，光滑凸起，半透明，产生β溶血。