[发明专利]一种防治农作物土传病害的生防菌复配剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明是一种用于防治农作物土传病害的生防菌复配剂及制备方法。

背景技术

近年来，随着我国农业产业结构调整，以温室、大棚为主的设施农业发展迅速。土壤有害生物侵染农作物根部和茎基部，造成农作物猝倒、根腐、立枯、枯萎等土传病害的发生面积逐年扩大。温室、大棚的多种蔬菜、水果、花卉等常年连作，土壤的温、湿度、营养条件有利于土传病菌繁殖，造成的损失通常达30％-40％，甚至绝产。由于引起土传病害的病原菌种类多，多数属于兼性寄生菌，寄主范围广泛，对土壤环境的适应能力强，存活方式多样，因此针对多种病原菌选育具有广谱抗性的抗病品种十分困难。利用化学农药处理土壤往往受到地力、化学因素等影响而难以发挥作用，且污染严重，农产品的安全性难以得到保证。施用广谱土壤熏蒸剂，会同时杀死土壤有益微生物，失去自然控制的土传病原菌会更加猖獗。因此，土传病害已经成为设施农业可持续发展的重要障碍。

生物防治是控制土传病害的有效方法，是通过调控根际有益和有害微生物间的相互作用而达到防治土传病害目的的，是一种对环境友好、经济、可持续的方法。细菌和木霉菌在土传病害的生物防治中占有非常重要的地位。生防菌的重要优势在于它的种类和数量众多，在植物根际和地上部分都大量存在，几乎每一种植物病原真菌都都能找到一种或几种有防治作用的细菌或木霉菌；它们作用方式较广，可以通过竞争作用、拮抗作用、寄生作用和诱导植物的抗性等对病原菌产生影响；生防菌的优势还在于它具有惊人的繁殖速度，在适宜的条件下，几十分钟就能分裂一次，这对于它们占领空间和生存竞争非常有利；许多细菌和木霉菌存在于植物的根际和地上部分，与植物建立了密切的联系，在生物防治中具有很大的优势；细菌和木霉菌均可以人工培养，便于控制研究和生产实践中的操作。可用于植物病害生防菌的种类很多，其中芽孢杆菌和木霉菌研究最为广泛。

我国利用枯草芽孢杆菌防治植物病害现已开发成功并投人生产的商品制剂有亚宝、百抗、麦丰宁、纹曲宁等。利用哈氏木霉菌防治植物病害现已开发成功并投人生产的商品制剂有特立克等。

但到目前为止，尚未见有高效枯草芽孢杆菌与绿色木霉的微生物复配制剂，也未见有大面积应用于农田防治土传病害的微生物复配菌制剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：克服目前生产上防治土传病害已有技术的不足，通过筛选大量农作物根际土壤拮抗微生物，分离出有拮抗作用的枯草芽孢杆菌和有拮抗作用的绿色木霉菌，将枯草芽孢杆菌和绿色木霉菌复配成微生物复配制剂。同时，研制出这种微生物复配农药的制备方法。

本发明技术解决方案的要点是：利用从作物根际土壤分离出的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和绿色木霉菌(Trichodermaviride)，将其分别纯化后转致试管斜面内作母菌剂。

将枯草芽孢杆菌和绿色木霉菌的母菌剂在三角瓶内分别进行振荡发酵培养作为二级菌种。再将枯草芽孢杆菌经发酵罐发酵制成发酵液。枯草芽孢杆菌和绿色木霉菌所采用的液体发酵培养基各种成分重量比均为：蔗糖30，酵母浸粉或酵母浸膏5，加水成1000，灭菌温度121℃、时间26分钟，发酵温度27℃-30℃，发酵时间3-5天，枯草芽孢杆菌浓度达到2×10¹⁰cfu/mL即可；绿色木霉孢子浓度达到孢子含量1×10⁸个/mL即可；

将绿色木霉菌接种在烧杯内固体培养基上，每100克固体培养基接种10毫升二级菌种，发酵培养成种子粉。所采用的固体培养基成分重量比为：玉米碎粒10.3、麦麸15.5、稻壳5.2、脲0.1、水68.9。，灭菌温度121℃、时间30分钟，发酵温度25℃-27℃，发酵时间7-10天，以固体培养基表面全部长出绿色木霉孢子粉，培养基干透即可。

防治土传病害的生防菌复配剂组成成分按重量比为：

枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)发酵液(芽孢菌浓度2×10¹⁰cfu/mL)7-9；

绿色木霉孢子粉(孢子含量1×10⁸个/g)7-9；

硅藻土或轻质碳酸钙    60-80；

磷酸氢二钾            1-3；

木质素磺酸钠          2-5。