[发明专利]一种测定土壤微生物生物量氮的方法

权利要求书

1.一种测定土壤微生物生物量氮的方法，其特征在于：

1)采用熏蒸-浸提的方法对土样进行处理：取土壤25-30g，放入 带沸石的装有25-40ml氯仿、20-40ml NaOH和湿润滤纸的真空干燥 器中，密闭抽气至氯仿沸腾3-5min，关闭阀门；在室温黑暗条件下培 养24-48h，打开干燥器检验是否漏气，若不漏气，取出氯仿和NaOH， 用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止；另作不熏蒸作为 对照；将熏蒸和不熏蒸土样分别用100ml 0.5M硫酸钾溶液振荡浸提 30-60min，过滤，得浸提液，分别进行以下步骤2)-4)中的操作；

2)向消煮管中依次加入浸提液5.0ml，由K₂SO₄、CuSO₄和Se 的重量比为90-100∶9-10∶1组成的混合加速剂1-3g，以及浓硫酸 8-10ml，摇匀；

3)采用梯度升温的方式对上述溶液进行加热：溶液预先加热至 100-110℃，开始梯度升温，依次使溶液于9-10min内升温至 120-130℃、10-12min内升温至140-155℃、11-13min内升温至 160-170℃、12-14min内升温至180-195℃、13-15min内升温至 200-220℃、14-17min内升温至205-240℃、16-19min内升温至 240-260℃、45-65min内升温至340-380℃，恒温3-4h后，冷却；

4)将消煮管中的溶液倒入蒸馏瓶中，用蒸馏水洗涤消煮管2-3 次，每次蒸馏水用量为10-20ml，同时加入70-100ml 10M NaOH溶 液进行蒸馏，采用浓度为1％硼酸10～20ml接收，采用已知浓度的标 准盐酸溶液进行滴定，确定所消耗的盐酸溶液的用量；

5)配制乙酰苯胺标准溶液：取乙酰苯胺试剂1.9296克，加二次 蒸馏水溶解，定容至1000ml容量瓶中，此溶液含有有机氮200mg/l， 以此溶液为母液进行逐级稀释至0-40倍；选取稀释后任意浓度的乙 酰苯胺溶液5.0ml进行步骤2)-4)中的操作；

以蒸馏水5.0ml、由K₂SO₄、CuSO₄和Se的重量比为90-100∶9-10∶ 1组成的混合加速剂1-3g、浓硫酸8-10ml配制的溶液为对照组，将 对照组同样进行步骤2)-4)中的操作；

按如下过程对试验结果的计算：

a.计算标准物质的回收率：

其中：V_空白-滴定对照组时所消耗的HCl溶液体积，V_标准物质-滴定乙 酰苯胺溶液时消耗的HCl溶液体积，n_标准物质-乙酰苯胺的质量浓度， 5-吸取乙酰苯胺溶液的体积；

b.有机氮含量的计算：

其中：V_熏蒸-滴定熏蒸样品时所消耗的HCl溶液体积，V_未熏蒸-滴定 未熏蒸样品时所消耗的HCl溶液体积，ts-样品的稀释倍数，m-烘 干土质量；

c.微生物生物量氮的计算：

ω(N)＝E_N/K_EN

其中：E_N-薰蒸土样有机氮量与未薰蒸土样有机氮之差，K_EN- 薰蒸杀死微生物体中的氮被浸提出来的比例为0.45。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中溶 液最终冷却至室温。