[发明专利]一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法

权利要求书

1.一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于按以下步骤进行操作：

(1)取大麦或麦芽1g，粉碎，以4℃提取缓冲液3ml提取1h，2800×g离心10min，将所得上清液收集至另一离心管中，再次向沉淀中加入3ml的4℃提取缓冲液，4℃提取1h，2800×g离心10min，合并两次所得上清液，沸水浴放置20min，4000×g离心10min，取上清液，即得蛋白溶液A；

(2)通过考马斯亮蓝定量蛋白法(Bradford法)绘制标准曲线，测定蛋白溶液A的总蛋白含量；

(3)吸取相当于14μg总蛋白的蛋白溶液A于微量离心管(eppendorf管)中，加入1/4样品体积的样品缓冲液，置沸水浴5min，1000×g离心3min后，以5％丙烯酰胺溶液为浓缩胶，12％丙烯酰胺溶液为分离胶，使用三(羟甲基)氨基甲烷/甘氨酸不连续系统(Laemmli系统)进行电泳，电泳结束后将凝胶浸入染色液染色1～2小时，然后用脱色液浸泡至背景清晰明亮，为凝胶拍照，使用凝胶分析软件对条带进行定量分析；

以上所述：

提取缓冲液为pH7.5，其中含有50mmol·L^-1三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，10mmol·L^-1氯化钠，1mmol·L^-1二硫苏糖醇，1mmol·L^-1乙二胺四乙酸二钠，余量为水；

样品缓冲液为pH6.8，含有三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)0.2mol/L，10％十二烷基磺酸钠(W/V)，5％2-巯基乙醇(V/V)，20％甘油(V/V)，0.05％溴酚蓝(W/V)，余量为水；

电泳缓冲液为pH8.3，含有Tris 0.25mol/L，甘氨酸1.92mol/L，0.5％SDS(W/V)，余量为水，使用前稀释五倍；

染色液中含有考马斯亮蓝R250 0.05％(W/V)，甲醇50％(V/V)，冰醋酸10％(V/V)，余量为水。

脱色液中含有甲醇5％(V/V)；冰醋酸7％(V/V)，余量为水。

2.根据权利要求1所述的一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所取大麦或麦芽的重量为扣除水分后的绝干重量。

3.根据权利要求1所述的一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所述步骤的第一步中，提取时需要连续震荡。

4.根据权利要求1所述的一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所述蛋白溶液A，当蛋白浓度低于0.5mg/ml时，对蛋白溶液A要进行浓缩，浓缩后得到蛋白溶液B，以蛋白溶液B为样品进行电泳。

5.根据权利要求4所述的一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于蛋白溶液A的浓缩方法为：取蛋白溶液A 300μl，加入1.2ml丙酮，-20℃放置30min，12000×g离心5min，弃去上清液，在通风橱内室温风干5min，向上述沉淀中加入缓冲液T 60μl，振荡溶解，得蛋白溶液B，取25μl溶液B，加入缓冲液T 75μl(4倍稀释)，摇匀。加入考马斯亮蓝(Bradford)工作液5ml，轻柔摇振，静置5min，在595nm下测定吸光值，由标准曲线及稀释倍数计算溶液B蛋白含量。

6.根据权利要求5所述一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所述蛋白溶液A的浓缩过程中，加入的丙酮需提前于-20℃进行预冷。

7.根据权利要求5所述一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所述缓冲液T为pH7.5，其中含有50mmol·L^-1三(羟甲基)氨基甲烷，10mmol·L^-1氯化钠，余量为水。

8.根据权利要求1所述一种检测啤酒大麦或麦芽中泡沫蛋白组分与含量的方法，其特征在于所使用的水为蒸馏水、去离子水和双蒸水。