[发明专利]葫芦素的医药新用途

说明书

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及葫芦素的医药新用途，具体地说是葫芦素在人白血病的治疗中的应用，即葫芦素有效单体成分单独或混合物在白血病治疗中的用途。

背景技术：

白血病是一种造血组织的恶性疾病，俗称“血癌”，特点是某一类型的白血病细胞在骨髓或其他造血组织中的肿瘤性增生，可浸润体内各器官、组织、使各个脏器的功能受损，产生相应的症状和体征。我国白血病患者约为3～4人/10万人口，小儿的恶性肿瘤中以白血病的发病率最高，据调查，我国<10岁小儿白血病的发病率为2.28/10万，任何年龄均可发病，男性的发病率高于女性。临床对白血病主要的治疗手段主要是化学治疗，但由于毒性大，易出现耐药性等问题，因而开发新的抗白血病化疗药物对于白血病的治疗具有重要意义，目前从天然产物中发现新的抗白血病药物受到广泛关注。

葫芦素(Cucurbitacins)属于19-甲基出现在C-9位上的一类四环三萜化合物，主要分布于葫芦科植物中，为一类已知结构的天然产物，市上有售。国内70年代初从中药甜瓜蒂中分离出了葫芦素系列化合物，包括葫芦素A-Q等，其中葫芦素B、E为主要的活性成分，分布应用最广。国内葫芦素片临床应用于肝癌和肝炎的治疗，国外有文献报道葫芦素体内可抑制大鼠walkers 256肉瘤、艾氏腹水癌的发生。葫芦素对肿瘤细胞具有细胞毒作用，可通过选择性地抑制A549、  MDA-MB-435和v-Src/NIH 3T3肿瘤细胞JAK/STAT3信号途径促进肿瘤细胞的凋亡。但是葫芦素抗白血病作用及机制的研究国内外尚未见报道。

葫芦素B分子结构    　　　　　　　　　葫芦素E分子结构

发明内容：

本发明的目的是提供葫芦素有效单体成分单独或混合应用在白血病治疗中的用途。

葫芦素有效单体包括葫芦素B、E及有相似结构的葫芦素系列化合物。所述白血病为急性白血病和慢性白血病

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

1、体外抗肿瘤实验：

葫芦素B、E对体外培养的实体瘤细胞，包括HeLa(人宫颈癌细胞)，BEL7402(人肝癌细胞)，SGC7901(人胃癌细胞)和HT1080(人成纤维瘤细胞)；以及白血病细胞K562、HL60均有不同程度的剂量依赖性抑制作用，且对白血病细胞比实体瘤细胞更敏感.

2、葫芦素B、E可延长小鼠P388白血病模型动物的存活期。

3、葫芦素影响人白血病K562、HL60细胞周期。

葫芦素E(10、30、50nM)作用于白血病细胞12小时，可使细胞周期明显阻滞于G₂/M期，G₂/M阻滞与上调周期抑制蛋白p21及下调CDK1蛋白从而抑制cyclin/CDK复合物活性有关。葫芦素在此浓渡范围内无细胞毒作用。

4、高剂量葫芦素可诱导白血病HL60细胞凋亡，机制为上调死亡受体-5(death receptor 5)，激活外源性细胞凋亡途径从而诱导细胞凋亡。

葫芦素有效单体单独或混合制备成注射液、粉针类非肠道或口服制剂形式用于白血病的治疗。

本发明为应用葫芦素(Cucurbitacins)有效单体单独或混合治疗白血病。葫芦素有效单体体内、体外抑制白血病细胞生长具有效果明显、毒性低、可长期连续给药、可与化疗及放疗合用的特点。

本发明的创新点之一在于首次发现在极低浓度(体外nM剂量级别)下，葫芦素可抑制白血病细胞的增殖，葫芦素抑制白细胞增殖是通过下调CDK1同时上调p21蛋白表达而使白血病细胞周期阻滞于G2/M期而实现的。首次发现高剂量葫芦素可诱导白血病HL60细胞凋亡，机制为上调死亡受体5(death receptor 5)，激活外源性细胞凋亡途径从而诱导细胞凋亡。葫芦素可延长小鼠P388白血病模型动物的存活期。以上实验结果证明葫芦素有效单体单独或混合可制备成治疗人白血病的药物。

附图说明：

图1为实施例1中葫芦素对不同人癌细胞增殖抑制作用

图2为实施例3中葫芦素E对人白血病K562、HL60细胞周期的影响

图3为实施例3中葫芦素E对人白血病K562、HL60细胞周期调控蛋白的影响

图4为实施例4中高剂量葫芦素E诱导人白血病HL60细胞凋亡作用

A为流式细胞仪检测细胞凋亡

B为DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡

C为AO/EB荧光染色检测细胞凋亡

图5为实施例4中高剂量葫芦素E对人白血病HL60细胞凋亡作用信号转导途径。

具体实施方式：