[发明专利]用于液相色谱分离系统中色谱柱的串联方法

说明书

技术领域

本发明涉及液相色谱分离系统中色谱柱之间的连接，具体地说是用于液相色谱色谱柱的串联以增加色谱柱柱长的方法，利用该方法可以有效地将两根或多根色谱柱串联以增加柱长，提高柱效。

背景技术

高效液相色谱(HPLC)作为分析手段，其优越性明显，如：适用范围广，分离效率高，流动相和分析柱使用方式及填料选择方便等特点。色谱柱是HPLC分离过程中的核心，而反相色谱柱其分析能力强，常作为分析柱的首选。随着蛋白质组学的发展，对于蛋白肽段等的分析需要更高效的分析手段。在shot-gun技术中，常常先将蛋白酶解成肽段，作为全组织的蛋白提取物，其蛋白数已有成千上万个，酶解成肽段之后，待分析的肽段还要增加几十倍达到几万，几十万，甚至几百万。目前一般都采用反相柱对其分离分析，但是对如此复杂的样品进行分析，要求柱效很高。目前增加柱效的方法主要有减小柱填料颗粒直径，减小柱内径，减小填料孔径以及增加色谱柱柱长等等。其中，减小柱填料颗粒直径和孔径时对筛板要求增加，色谱柱反压增大且容易堵塞色谱柱，成本很大；减小柱内径时流速也会相应降低，这样就需要更小死体积的检测池，要求很高；而增加柱长则是一种很方便的方法，其不需要改变分离检测系统中的其他配置。目前增加柱长采用的方法为填充更加长的色谱柱，但是填充更长的色谱柱时需要非常高压力来压实填料，这样一般的装柱仪器达不到要求，即使能达到要求的仪器，其色谱柱的柱管及其连接处也很难满足高压的要求。

目前国外有人报道[文献1J.Chromato gr.A 2006，1109，191-196.]对内径为4.6mm的色谱柱之间采用金属连接管和两个金属连接头进行连接，该方法可以增加柱长，但是会引入较大死体积，且连接处在高压力条件下可能出现漏液等问题；并且这种方法非常不适合目前在蛋白柱样品分析时采用的微柱连接，因为降低柱内径时流速也降低，引入死体积过大时会大大降低柱效，有时会比单根分析柱的柱效低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于液相色谱分离系统中色谱柱的串联方法，其可以有效地增加色谱柱柱长，在保证最小柱连接时死体积的情况下，极大提高柱效。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

用于液相色谱分离系统中色谱柱的串联方法，具体步骤如下：

1)在主体色谱柱与被接色谱柱的连接端分别对应的设有一个金属或PEEK连接头；

2)在主体色谱柱和被接色谱柱连接端的端面分别设置一个筛板，用与连接头相匹配的、金属或PEEK材料的二通将主体色谱柱与被接色谱柱串接为一体，通过二通与连接头上相对应的内外螺纹将色谱柱与二通锁紧。

在主体色谱柱与被接色谱柱的连接端端头外侧最好分别设置一嵌环，连接头置于嵌环的内侧。

所述主体色谱柱与被接色谱柱可为相同或不同内径的色谱柱；其内可填装有相同或不同的色谱填料；其柱长可相同也可不相同。

本发明具有如下优点：

1.提高柱效。目前越来越多的复杂样品需要分析，而高效液相色谱则作为最常用的高效的分析方法。然而目前色谱柱市场上很难提供单根柱效很高的填充柱，所以很难对其分析，目前一般的作法是采用二维的分析方法，但是这样会需要更多的仪器配置，增加成本。本发明采用一个金属或者PEEK材料的二通和两个色谱柱中常用的筛板将两根或着多根色谱柱串联以增加柱长；串联形成的色谱柱提高了单根色谱柱的柱效和分析能力，为复杂样品的分析提供更强大能力的分析柱。

2.简单明了。发明方法原理简单，通过二通的连接很方便，该方法可以很便捷地将两根或多根色谱柱串联起来，以提高色谱柱分析能力。

3.连接时的死体积小。本发明在二通两端都使用筛板，可以有效减少柱连接时的死体积，并防止色谱柱中的填料被冲出。

4.使用方便。本发明串联的色谱柱可以方便拆卸，并且拆卸后可重新安装使用，亦可更换一根或单根新柱用于串联。

5.应用效果好。本发明可为蛋白组学等复杂样品分析领域提供高效的分析色谱柱。在实际应用中，如蛋白质酶解肽段的分析，通过串联柱在小于7个小时的时间内的分析结果可以与大于20小时的二维分析结果相媲美，有着广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明方法采用的各个部件间串联的分解示意图；

图2为采用本发明串联后的分析色谱柱结构示意图；

图中标号：1为筛板，2为二通，3为金属或PEEK连接头(1/16或1/32)，A为主体色谱柱(1/16或1/32)，B为被接色谱柱(1/16或1/32)。

具体实施方式

下面通过实例进一步描述本发明，但不限于本实例。