[发明专利]人中期因子Midkine的制备及新用途

权利要求书

1.中期因子蛋白或其编码基因的用途，其特征在于，用于制备增加血小板的组合物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物用于防治血小板减少相关疾病。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的血小板减少相关疾病选自：多发性瘀斑、粘膜出血、术后大出血。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的中期因子是人中期因子。

5.一种制备和纯化中期因子蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)利用含有重组表达载体的重组大肠杆菌表达中期因子，获得中期因子表达产物；

其中，所述的重组表达载体中含有中期因子表达盒，所述的中期因子表达盒中含有中期因子编码基因；

(2)利用强阳离子交换层析从步骤(1)获得的表达产物中分离出中期因子蛋白。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的获得中期因子表达产物步骤包括：

(a)培养所述的重组大肠杆菌使之表达中期因子，裂解菌体，收集含中期因子包涵体蛋白的裂解产物；

(b)将步骤(a)获得的含中期因子包涵体蛋白的裂解产物进行蛋白变性和复性处理，从而获得可溶性的中期因子表达产物。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，采用超声破菌和溶菌酶处理双重方法来裂解菌体。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的蛋白变性采用盐酸胍作为变性剂。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的强阳离子交换层析采用：强阳离子交换凝胶SP Sepharose FF作为层析介质。

10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的中期因子蛋白纯度大于99％。