[发明专利]苎麻高效遗传转化的方法

权利要求书

1、一种适用于苎麻遗传转化的方法，包含农杆菌介导的转化步骤，其特征在于，取苎麻的实生苗的子叶与农杆菌共培养，然后将共培养后的子叶挑出，转入到选择培养基上脱菌和选择培养，将选择培养基中产生的抗性芽分别转入芽伸长培养基和生根培养基中进行芽伸长培养和诱导根的形成，直至抗性芽再生为完整的候选转化植株，采用GUS、PCR和Southern方法对获得的候选转化植株进行检测，得到苎麻转化植株，其具体步骤如下：

1)将灭菌后的苎麻种子接种于1/2MS基本培养基上，在光照为3000lux和25～28℃条件下使种子萌发，取萌发4天后的实生苗的子叶作为转化用的外植体；

2)将步骤1)的子叶浸泡在OD值为0.25～1.5的农杆菌菌液中5～10分钟，并将该子叶置于共培养培养基上培养，该共培养培养基的组分为MS基本培养基附加0.5mg/L噻苯隆、0.01mg/L吲哚乙酸、0～200mg/L乙酰丁香酮、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.6～6.0，培养的温度为15～28℃，培养时间为1～4天，在3000lux下光照培养或暗培养；

3)将步骤2)共培养1～4天后的子叶转入到选择培养基上培养，该选择培养基组分如下：MS基本培养基附加0.5mg/L噻苯隆、0.01mg/L吲哚乙酸、25mg/L卡那霉素、500mg/L头孢霉素、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.8；

4)将步骤3)的子叶转移到步骤3)所述的选择培养基上培养，培养温度为25±3℃，培养时间6～8周，至抗性再生芽产生；

5)将步骤4)的抗性再生芽转入MS基本培养基附加1.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、25mg/L乙酰丁香酮、250mg/L头孢霉素、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉的伸长培养基上，培养至芽伸长约2厘米时将其转入到生根培养基上诱导生根，生根培养基组分如下：1/2MS基本培养基附加0～0.5mg/L萘乙酸、3％葡萄糖和0.8％琼脂粉，pH为5.8，培养约2周后得到候选转化植株；

6)采用GUS、PCR和Southern方法对步骤5)的候选植株进行检测，得到苎麻转化植株。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中的农杆菌菌液浓度OD值为0.5，乙酰丁香酮的浓度为50mg/L，培养基pH值为5.9，培养温度为20℃，培养时间为3天，暗培养。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中的萘乙酸浓度为0.025mg/L。

4、权利要求1-3任一项所述的方法在苎麻遗传转化中的应用。