[发明专利]鸡毒霉形体抗体免疫胶体金快速检测试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫应用领域，涉及动物分子生物学、免疫学等相关领域。具体的讲，本发明属于鸡毒霉形体抗体快速检测试剂盒，分别用于鸡血清中鸡毒霉形体抗体的检测，以确定被检鸡是否感染鸡毒霉形体或免疫过的鸡体内是否产生了相应的抗体。

背景技术

众所周知，禽流感、新城疫、法氏囊、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡毒霉形体病、马立克、减蛋综合症等疫病是危害全球养禽业的重要疫病。

鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum)是一类缺乏细胞壁、能独立繁殖的最小的单细胞原核微生物，属于原核生物中软壁菌门软皮体纲。主要引起鸡的慢性呼吸道疾病，是养禽业相当棘手的疾病问题之一。主要引起呼吸道感染及免疫抑制，多年来一直在各类鸡群中广泛存在，至今仍没有有效的疫苗进行防控，致使鸡群长期带毒，常引起其他疫病的继发感染，给我国养鸡业生产造成了很大的经济损失。

根据血清学调查，霉形体病在我国感染率很高，大部分鸡群的感染率超过50％，有的甚至高达70％-90％，而且经常继发其它疾病，尤其是与大肠杆菌或新城疫、传染性支气管炎等病原并发感染，造成鸡群大量死亡(王承宇，宣华.鸡毒支原体病研究进展.中国预防兽医学报，2000，22(增刊)：208-211)。而清除这种疫病的最有效的方法是淘汰带毒鸡群，保留健康不带毒的鸡群。要做到这一点，就要有一种快速简便的检测方法来确定感染鸡群。而已有的研究中，没有合适的快速检测鸡毒霉形体的新方法。如琼脂扩散试验(Agarose gel immunodiffusion；AGID)、血凝抑制试验(Hemagglutination inhi-bition；HI)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay；ELISA)、血清平板凝集试验(serum plate agglutination test；SPA)等，这些方法有的耗费时间长(如琼脂扩散试验需24～48小时；血凝抑制试验需2～3小时；ELISA试验需3～5小时等)，有的需要昂贵的仪器设备和繁琐的操作步骤，只能在实验室完成，不便于适时和快速诊断，血清平板凝集试验判定结果的时间比较短，但其主观性比较强，没有一定的经验很难做出准确的判定。

免疫层析(immunochromatography)是出现于八十年代初期的一种独特的免疫分析方法，该方法的核心技术是以条状纤维层析材料为固相，通过毛细管作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生高特异性、高亲和性的免疫反应。胶体金免疫层析分析(gold-immunochromatography assay；GICA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术(Osikowicz G et al.One-step chroma-tographic immunoassay for qualitative determination of choricogonadotropin in urine.ClinChem.1990，36，1586)。层析过程中，金标记物与事先固相化于层析材料(例如硝酸纤维素膜，即NC膜)上的抗原或抗体(检测线)发生特异性的免疫反应而被截留，进一步富集，形成肉眼可见的紫红色条带，从而得到直观的实验结果，达到快速检测的目的。这种方法对所使用的抗原抗体的要求较高，要求具有好的特异性和高纯度。

依据这种原理，已经研制出了很多胶体金免疫层析快速检测试纸条。在人医应用方面，国内外已在激素、传染病病原的抗原和抗体、性病病原、细菌、寄生虫、肿瘤标记物、心血管病标志物、药物以及其他一些蛋白质等方面应用了金标免疫层析试纸条。在兽医应用方面，例如在猪瘟、犬细小病毒病等方面也应用了金标免疫层析试纸条。在鸡疫病诊断和检测方面，中国发明专利(专利号ZL99101537.1)，公开了一种畜禽疫病快速诊断试纸条的制备及应用，但该发明的要点是针对畜禽疫病病原的检测，并未涉及对鸡毒霉形体抗体的诊断检测。

附图说明：

图1：本发明的总体技术路线图

图2：本发明试纸卡的侧视图，图中：

1样品垫(样品端)；2为金标垫；3为硝酸纤维素膜(NC膜)；4为吸收垫(手柄端)；5为检测线，即T线；6为质控线，即C线；7为不吸水的支撑薄片条；8为测试卡；9为加样孔。

图3：本发明试纸卡的俯视图，图中：