[发明专利]细菌表面展示新系统、方法及应用

权利要求书

1.一种细菌表面展示新系统，包括编码目标蛋白的基因序列，其特征在于，还包括负责跨膜定位和转运的鳗弧菌核苷酸序列，所述编码目标蛋白的基因序列位于所述鳗弧菌核苷酸序列的C端，所述鳗弧菌核苷酸序列编码的蛋白包括鳗弧菌外膜脂蛋白的信号肽和鳗弧菌外膜蛋白的跨膜锚定序列，所述跨膜锚定序列连接所述信号肽和所述目标蛋白。

2.如权利要求1所述的细菌表面展示新系统，其特征在于，所述鳗弧菌外膜脂蛋白为Wza蛋白，所述鳗弧菌外膜蛋白为Omporf1蛋白，OmpU蛋白或Omp26La蛋白。

3.如权利要求2所述的细菌表面展示新系统，其特征在于，所述鳗弧菌核苷酸序列为编码所述Wza蛋白的信号肽及N端的前11个氨基酸的核苷酸序列和编码所述Omporf1蛋白的6-50位氨基酸的核苷酸片段/编码OmpU蛋白的180-238位氨基酸的核苷酸片段/编码Omp26La蛋白的80-158位氨基酸的核苷酸片段。

4.如权利要求3所述的细菌表面展示新系统，其特征在于，所述目标蛋白是迟钝爱德华氏菌的EseB抗原蛋白。

5.一种利用权利要求1所述的细菌表面展示新系统在细菌的细胞表面展示目标蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.将所述细菌表面展示新系统构建入表达载体上，获得重组表达载体；

b.将所述重组表达载体导入宿主菌中进行表达，获得融合蛋白，所述融合蛋白包括所述信号肽、所述跨膜锚定序列和所述目标蛋白。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述鳗弧菌外膜脂蛋白为Wza蛋白，所述鳗弧菌外膜蛋白为Omporf1蛋白，OmpU蛋白或Omp26La蛋白。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述鳗弧菌核苷酸序列为编码所述Wza蛋白的信号肽及N端的前11个氨基酸的核苷酸序列和编码所述Omporf1蛋白的6-50位氨基酸的核苷酸片段/编码OmpU蛋白的180-238位氨基酸的核苷酸片段/编码Omp26La蛋白的80-158位氨基酸的核苷酸片段，所述宿主菌为大肠杆菌或鳗弧菌。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述表达载体是pUC18，所述宿主菌为大肠杆菌Top10或鳗弧菌减毒株MVAV6203，所述目标蛋白是迟钝爱德华氏菌的EseB抗原蛋白。

9.如权利要求1所述的细菌表面展示新系统在活疫苗开发，抗体制备，多肽文库筛选，环境生物吸附剂开发和全细胞生物催化方面的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述活疫苗是鳗弧菌多效价载体疫苗。