[发明专利]一种人亲和素蛋白在制备抗肝癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因和医药领域，具体的说，本发明提供了一种亲和素蛋白的用途。

背景技术

亲和素蛋白(Cyclophilins，CyPs)是一类高度保守、普遍存在肽基——脯氨酰顺反异构酶活性(PPIase)的家族，它与FK560结合蛋白和parvulins共同组成了亲免素超家族(Biotechnologia(In Polish)3，135-152；Acta Pharm.45，413-420；Cell.Mol.Life Sci.55，423-436)。尽管这三种蛋白质在序列上互不关联，在结构上也不相同，但他们都具有PPIase活性，都可以催化单肽或蛋白质中脯氨酸酰亚胺肽键的顺反异构化，从而加速细胞周期蛋白质合成过程中蛋白质的折叠。已有报道，一种人的CyP蛋白可结合HIV-1中的一种蛋白质，具有潜在的引起HIV感染的作用。

CyPs广泛分布于从微生物到乳动物的各类物种中。Cyclophilin A(CyPA)是首先从牛的胸腺细胞中发现的CyP家族中第一个成员，并验证它具有PPIase活性(Science，226，544-547；Nature 337，473-478)。重组人T细胞的cyclophilin A(hCyPA)的三维结构及它与CsA、四肽及一些二肽形成的复合物的三维结构已有报道(Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.88，9483-9487；J.Mol.Biol.228，539-550；J.Mol.Biol.234，1119-1130.；Nature，353，276-279；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.88，3324-3328；Biochemistry，35，7362-7368)。CyPA与HIV相关蛋白质的复合物的结构也已报道(Cell，87，1285-1294；Structure 5，139-146)。CyP家族的其他成员与CyPA具有序列同源性及三维结构类似的特性(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90，11850-11854；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91，5183-5186；J.Mol.Biol.33l，45-56)。

CyPJ是CyP家族的新成员，CYP-J cDNA长1.25Kb，编码161个氨基酸，已从人的胎脑cDNA文库中分离并鉴定(Cytogenet.Cell Genet. 92，231-236)。在氨基酸序列上与线虫(C.elegans.)10具有72％的同源性。其具体核苷酸和氨基酸序列详见NCBI网站上基因登陆号为AF146799的基因报告。

发明内容

本发明要解决的问题是人亲和素蛋白在制备抗肝癌药物中的应用。

本发明提供了亲和素蛋白CYPJ(NCBI网站上基因登陆号为AF146799)的一种应用，即其在制备抗肝癌药物中的应用。

本发明中，所述的药物可以是片剂或者针剂。

研究表明，转染有本发明的CYPJ基因的细胞与空白对照相比，能促进细胞的克隆形成率；转染后的293T、COS7和Hela细胞都可以引起G0-G1期细胞减少，S期细胞增多，G2/M期无明显变化，尽管程度有差别，但是趋势是一致的。S期是细胞物质合成周期，S期增多，说明CYPJ可以促进细胞物质的复制增殖。从而认为本发明的CYPJ蛋白有促进细胞增长的作用。

表达有CYPJ蛋白的细胞及其对照注射在裸鼠的左右腋下，裸鼠的皮下移植瘤成功率为100％，潜伏期为14天，瘤体表面光滑或者呈结节状，直径大于2cm时有溃破和干涸。60天后比较左右两侧肿瘤的重量，结果注射有表达CYPJ蛋白的细胞的一侧的肿瘤明显大于对照，统计结果有显著性差异。用不同的单克隆重复三次，结果都有显著性差异，因而认为该基因有促进肿瘤细胞生长的功能。

肝癌病理样本分析表明，CYPJ蛋白在癌旁组织中表达要普遍低于在肝癌组织中的表达量，而且表达量的差异与肝癌的分级有密切关系。

因此，本发明的CYPJ可以作为靶标，筛选抗肝癌物质。能够抑制cypj的活性或者表达量，既可以用于制备抗肝癌药物。

本发明的CYPJ可以作为靶标，筛选抑制CYPJ活力的物质或者方法。筛选方法包括以下步骤：A选择候选化合物；B提供检测CYPJ表达或者活性的体系；C用CYPJ的检测体系选择候选化合物；D确定CYPJ表达量或者活性在候选化合物的影响下的改变。