[发明专利]ABCA1基因第7号外显子上的rs2230806多态位点及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物基因技术领域多态位点的检测方法，特别是一种ABCA1(ATP-binding cassette transporter subfamily A number 1，ABCA1)基因第7号外显子上的rs2230806多态位点及其检测方法。

背景技术

糖尿病是一种由遗传和环境因素相互作用而引起的复杂病。由于其病因不清，目前临床上只能对糖尿病患者进行对症治疗。个体在患病程度、肝肾功能、营养状况、生活方式等有一定差异，可导致机体对药物反应大小不一。此外由于个体之间存在遗传差异，决定了个体对药物的敏感性、毒副作用等反应也存在一定的差异。因此揭示遗传因素对药物反应的影响将有助于研究和预测患者对药物治疗反应的关系，为指导个体化合理用药打下基础。

ABCA1基因位于染色体9q31.1，约147kb，包含50个外显子，其编码2261个氨基酸组成的跨膜糖蛋白，参与生物体内脂类、胆固醇、代谢产物及药物等的膜间转运。目前研究表明，ABCA1在脂代谢中主要参与胆固醇逆转运，可以介导细胞内胆固醇外流，最后胆固醇被转运到肝脏分解代谢并通过胆道排泄。最近又有研究见到，ABCA1亦参与糖代谢，与糖耐量及胰岛素分泌相关，Abcal基因敲除小鼠表现为糖耐量及胰岛素分泌受损，且对罗格列酮治疗无效【Brunham LR，Kruit JK，Pape TD，Timmins JM，Reuwer AQ，Vasanji Z et al.Beta-cell ABCA1influences insulin secretion，glucose homeostasis and response tothiazolidinedione treatment.Nat Med 2007；13：340-7.】。研究表明ABCA1基因的表达受过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)的调控，PPARγ可通过活化肝X受体α上调ABCA1基因的表达。已明确PPARγ是罗格列酮等噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂的主要作用靶点，该类药物主要通过结合和活化PPARγ，诱导脂肪生成酶和与糖代谢调节相关蛋白的表达，促进脂肪细胞和其他细胞的分化，并增强靶组织对胰岛素的敏感性，减轻胰岛素抵抗，且对于胰岛功能有保护作用【Elte JW，Blickle JF.Thiazolidinediones for the treatment of type2 diabetes.Eur J Intern Med 2007；18：18-25.】。

对现有技术文献的分析表明，ABCA1基因变异可能影响PPARγ介导的靶组织对胰岛素的敏感性以及血糖水平的改变，但在目前的遗传学研究中仅有ABCA1多态位点与2型糖尿病易感性相关的报道，未见到有ABCA1基因变异与糖尿病患者用罗格列酮后胰岛素敏感性和血糖水平变化存在相关的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种ABCA1基因第7号外显子上的rs2230806多态位点及其检测方法。本发明同时涉及一种分离核酸、一种特异性核酸引物，还揭示了ABCA1基因rs2230806多态位点在预测糖尿病患者用罗格列酮后胰岛素敏感性和血糖水平变化方面的用途。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明所涉及的ABCA1基因第7号外显子上的rs2230806多态位点，在人ABCA1基因第7号外显子的SEQ ID NO：1所示序列的第150位核苷酸，所述的ABCA1基因第7号外显子的SEQ ID NO：1所示序列的第150位存在G具有单核苷酸多态性，在其互补链上为C等位基因。

所述的第7号外显子的SEQ ID NO：1所示序列，其第150位的A→G的变异会造成ABCA1基因第219个氨基酸序列由精氨酸到赖氨酸的改变。其中携带A/A基因型的糖尿病个体用罗格列酮后，降糖作用最明显，A/G基因型次之，G/G基因型携带者的降糖作用最差；携带G等位基因(其DNA互补链上为C等位基因)的糖尿病患者用罗格列酮后胰岛素敏感性改善程度和血糖降低程度较非G等位基因携带者差。

本发明所涉及的ABCA1基因第7号外显子上的rs2230806多态位点的检测方法，包括以下步骤：

(a)用常规酚氯仿法从人的血液中提取DNA，浓度校正到50ng/μl，作为DNA模板；

(b)设计特异性核酸引物，加入dNTP，Taq酶，DNA模板灭菌双蒸水等试剂，用聚合酶链式反应扩增目的基因；