[发明专利]百合多糖纯化的乙醇浓度梯度工艺方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种百合多糖提取工艺方法，尤其是一种适用于工业化生产的百合多糖的纯化工艺。

背景技术

作为一种中医引用两千多年的中药，百合有着明确、显著的疗效(参见《神龙本草经》、《别录》和《圣惠方》中的记载)。百合中药功效特点主要表现在“滋补与保健”上，即养阴清热、润肺止渴、宁心安神和补中益气之效。在百合有效成分中百合多糖极具的功能性和经济价值，它的功能性主要包括良好的增强免疫调节的作用、抗肿瘤性、抗氧化、滋补强壮及抗衰老作用和明显的降血糖功能，百合多糖在百合中的百分含量处于百合成分含量的前三位。百合多糖提取可为开发生产百合多糖滋补与保健产品，以及开发多糖新型药物提供原料。

现有实验室用的浸提、乙醇沉淀、脱蛋白的百合多糖提取工艺一般得到的是百合粗多糖，而要得到较纯的百合多糖，目前通常是采用两种工艺方法：一是在实验室里通过层析柱的方法，该法提取量小，生产效率低，且百合多糖损失量大，多糖得率不高，难以应用在工业生产中；二是利用正丁醇/氯仿混合液通过3-5个循环(Svage法)进行提纯，但该法氯仿用量大，残留量大，毒性强，污染严重，成本也高，纯化效率低，对工业化生产不利。

经对现有技术文献的检索发现，目前国内外没有与百合多糖提取相关专利文献报道，在非专利文献中，有百合多糖提取工艺相关文献报道，如层析柱的方法(刘成梅，付桂明等，百合多糖的纯化与化学结构鉴定研究，食品科学，2002，23(5)：114)和Svage法(刘成梅，万茵等，百合多糖脱蛋白方法的研究，食品科学，2002，23(1)：89)，但尚无百合多糖纯化的乙醇浓度梯度工艺方法的有关报道，也无百合多糖提取产业化方面的报道。

发明内容

针对百合多糖纯化工艺技术的上述不足，本发明提供一种适用于工业化生产的百合多糖的纯化工艺，即乙醇浓度梯度纯化百合多糖新工艺，它在保证百合多糖的纯度和得率的同时，减少氯仿的用量，从而降低毒性溶剂的污染，降低生产成本，提供工业生产的适用性。本发明是高效提取高纯度的百合多糖的新型工艺。

本发明是通过以下技术方案实现的，本发明在百合多糖浓缩液经醇沉、去蛋白一次后，利用75％-95％浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤2-5次，制得高纯度的百合多糖。采取多次洗涤的目的是变性并去除蛋白酶，氨基酸杂质，同时低浓度的乙醇可以带走大部分小分子量的寡糖，乙醇浓度梯度纯化重复的次数越多，产物越纯越高，但多糖损失越大。

利用本发明乙醇浓度梯度纯化，可以在得到纯度大于70％的百合多糖纯品，百合多糖得率为百合中百合多糖含量的80％，同时可减少百合多糖中氯仿残留量65％以上，工艺流程简单高效、经济和利于环保。

具体实施方式

以下结合实例详细说明本发明。

实施例一：

将新鲜百合球茎，自然晾干后在60℃左右烘至全干，然后打碎过筛备用。称取百合粉经85％乙醇于80℃下回流约10h，过滤。滤渣用用去离子水55℃下浸提5h，过滤，得百合多糖浸提液粗品。

百合多糖浸提液经减压浓缩后以四倍体积的90％的乙醇沉淀，过滤取沉淀加水溶解后采用Svage法去蛋白一次(Svage法为加入等体积氯仿/正丁醇混合液，混合液中氯仿/正丁醇的体积比5:2，充分振荡)，沉淀后取上清液，得到粗制百合多糖溶液。采用粗百合多糖饱和溶液加蛋白酶进一步酶解蛋白，然后用四倍体积乙醇沉淀。取沉淀分别用75％乙醇、85％和95％的纯乙醇洗涤并重复2次(梯度乙醇溶液洗涤法)，最后一个循环用丙酮，乙醇洗涤，沉淀干燥后得到百合多糖精提产品。

由此例乙醇浓度梯度纯化2次制备得到的百合多糖纯品，其纯度为75％以上，百合多糖得率为百合中百合多糖含量的86％，同时减少百合多糖中氯仿残留量约80％，具有工艺流程简单、经济和环保等工艺优点。

实施例二：

将新鲜百合球茎洗净，沙布袋包装20公斤，投入200升的提取罐，用去离子水95℃下浸提2h，然后转移提取液至浓缩罐。提取罐中加入去离子水，重复提取2次，转移提取液至浓缩罐。将3次提取液在浓缩罐中90℃下抽真空浓缩，浓缩至30％出料，得百合多糖浸膏粗品。