[发明专利]钙网蛋白-血小板因子-4融合蛋白及用途

说明书

技术领域

本发明涉及DNA重组技术和药物领域。具体的说，本发明涉及一种具有钙网蛋白特异性的融合蛋白，及以该蛋白为活性成分的药物及在制药行业中的应用。

背景技术

钙网蛋白是正常人体内的一种细胞因子，系一单链多肽，由53个氨基酸组成。hEGF是一种作用较广的促有丝分裂原，具有多种生物学功能。在人乳腺癌、肺癌等实体肿瘤细胞的表面，存在着异常大量的表皮生长因子受体。依据这已特性，可以利用EGFR的配体或抗体与毒素蛋白融合，研制导向毒素式的抗肿瘤药物。

血小板因子—4是人体内正常存在的蛋白，是一种血管生成抑制因子。

发明内容

本发明目的是提供一种钙网蛋白受体特异性的融合蛋白，该蛋白可以特异性的进入靶细胞，并将靶细胞杀死。

本发明的融合蛋白由人钙网蛋白与血小板因子—4融合而成，该融合蛋白的编码基因具有人表皮细胞因子的核苷酸序列及血小板因子—4的核苷酸序列。

本发明的另一目的是提供一种新的以本发明的融合蛋白为活性成分的抗肿瘤的药物，特别是乳腺癌、肺癌及肝癌。

本发明的又一目的是提供本发明的融合蛋白在制备抗肿瘤药物方面的用途。以本发明的融合蛋白作为活性成分，该药物用于治疗肿瘤。在需要的时候，在上述药物中还可以含有一种或多种药物可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、湿润剂等。

具体实施方式

1、构建融合蛋白

根据钙网蛋白和血小板因子—4基因的序列，分别设计引物，以RT-PCR法扩增出两者的cDNA，酶切后连接入pET22b，经过酶切鉴定及测序分析为正确序列。

2、融合蛋白表达

所构建的融合蛋白基因转化大肠杆菌，经过IPTG诱导，SDS-PAGE分析，上述融合蛋白在大肠杆菌中高效表达。

3、融合蛋白的变性、复性及纯化

融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达，经过超声破碎，包涵体变性，在复性液中复性，利用层析法获得纯度95％以上的融合蛋白。对该蛋白测序表明，所得到的蛋白确实为所发明的目的蛋白。

4、观察融合蛋白对不同肿瘤细胞的生长的抑制作用。

以该融合蛋白分别对几株不同的肿瘤细胞株作了量效关系实验，比较融合蛋白对不同肿瘤细胞株体外细胞毒作用。