[发明专利]一种重组甲基营养杆菌及其应用

权利要求书

1.一种重组甲基营养杆菌，是将丝氨酸羟甲基转移酶基因插入到原核细胞表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体，再将所述重组表达载体导入大肠杆菌中得到重组菌，以该重组菌作为供体菌，以转入帮助质粒pRK2073或pRK2013的重组大肠杆菌为帮助菌，以甲基营养杆菌(Methylobacterium sp.)MB200为受体菌，通过三亲本杂交将所述重组表达载体导入到甲基营养杆菌(Methylobacterium sp.)MB200中，得到重组甲基营养杆菌；所述甲基营养杆菌(Methylobacterium sp.)MB200的保藏号为CGMCCNo1526。

2.根据权利要求1所述的重组甲基营养杆菌，其特征在于：所述重组表达载体为将所述丝氨酸羟甲基转移酶基因插入到pLAFR3的多克隆位点，得到的重组表达载体pLAFRg；所述三亲本杂交中的供体菌为将pLAFRg导入大肠杆菌中得到的重组菌；所述帮助菌为将帮助质粒pRK2073或pRK2013导入大肠杆菌中得到的重组菌。

3.根据权利要求2所述的重组甲基营养杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌为DH5α。

4.根据权利要求1、2或3所述的重组甲基营养杆菌，其特征在于：所述丝氨酸羟甲基转移酶的氨基酸序列如GenBank Accession Number L33463所示。

5.根据权利要求4所述的重组甲基营养杆菌，其特征在于：所述丝氨酸羟甲基转移酶基因的编码序列是序列表中序列1的自5’端第79-1383位核苷酸。

6.根据权利要求5所述的重组甲基营养杆菌，其特征在于：所述重组甲基营养杆菌为甲基营养杆菌(Methylobacterium sp.)MB202，其保藏号为CCTCC No M207126。

7.一种生产丝氨酸羟甲基转移酶的方法，是发酵培养权利要求1至6中任一所述的重组甲基营养杆菌，得到丝氨酸羟甲基转移酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述发酵培养的培养基按照如下方法配制：(NH₄)₂HPO₄ 3g、K₂HPO₄ 2g、NaCl 1g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、FeSO₄·7H₂O10mg、MnSO₄·4-6H₂O 5mg，维生素B1 10μg、核黄素20μg、泛酸钙20μg、维生素B6 20μg、生物素1μg、对氨基苯甲酸10μg，加水到1000ml，pH7.0，灭菌后加入体积百分比为1.25％的甲醇；所述发酵的培养温度为28-32℃；培养时间为48-72小时。

9.一种生产L-丝氨酸的方法，是培养权利要求1至6中任一所述的重组甲基营养杆菌的静息细胞，得到L-丝氨酸。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述静息细胞的培养体系为：甘氨酸10-60mg，甲醇50-100mg，菌体10⁸-10⁹CFU，pH8.5的50mM Tris-HCl至终体积1mL；所述培养温度为28-37℃，所述培养时间为48-72小时。