[发明专利]一种从黄芪中提取毛蕊异黄酮－7－O－β－D－葡萄糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从中药中提取、分离单体化合物的方法，具体地说，涉及一种从黄芪黄酮粗提物中分离高纯度毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。属中药有效成分提取方法。

背景技术

黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，具有补气固表、利尿排毒、排脓、敛疮生肌等功效。毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷属于黄酮类化合物中的异黄酮类，是黄芪中含量最高的一种黄酮成分。

药理研究表明：毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷具有多种药理活性，具有抑制低密度脂质蛋白的过氧化、清除DPPH自由基等抗氧化作用，同时具有抗心肌缺血(CN01126608.2)以及抗柯萨奇病毒(CN200510110641.3)等药理作用，因此毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷具有非常重要的药用价值；同时毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷是黄芪中的主要黄酮成分，并且具有紫外吸收便于检测的特点，因此制备高纯度毛蕊异黄酮苷不仅为黄芪黄酮药效药理研究奠定物质基础，而且对于黄芪及相关制剂的质量控制和标准化具有重要的现实意义。

但由于黄芪中黄酮成分复杂且含量较低(＜1‰)，常规的分离方法需要反复硅胶柱层析，不仅工艺复杂耗时，而且需要消耗大量有毒有害有机溶剂，不利于工业化生产。最新的分离方法如高速逆流技术虽然能达到快速分离的目的，但对生产设备要求较高，同时进样量受到一定限制，因此目前还未能应用于大规模生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种简单易行、适合于工业化生产的从黄芪中分离高纯度毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种从黄芪中提取毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，包括如下步骤：

1)黄芪黄酮的提取：以黄芪为原料，粉碎后用醇溶液进行回流提取，提取液减压浓缩除去溶剂，得到黄芪黄酮粗提物；

2)浓缩富集：黄芪黄酮粗提物加水溶解后上大孔树脂，分别用水及乙醇溶液进行分步洗脱，收集乙醇洗脱部分得到富集液；

3)重结晶：富集液减压蒸干后加甲醇重结晶，获得高纯度毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

其中，步骤1)中所述醇溶液为乙醇或甲醇，浓度为60～100％，醇溶液与黄芪原料的液固比为10～30ml/g。

所述回流提取的次数为2～3次，回流时间2～3小时。

本发明的回流提取还可采用醇溶液微波辅助提取或甲醇索氏提取。

所述醇溶液微波辅助提取的提取次数为2～3次，温度为90～110℃，时间为20～30分钟，醇溶液与黄芪原料的液固比为20～30ml/g。

所述甲醇索氏提取中提取时间为3～5小时。

本发明的减压浓缩可采用本领域常用的方法和设备进行。

步骤2)中乙醇溶液洗脱时，分别采用20％乙醇和40％乙醇溶液洗脱，或是采用40％乙醇溶液洗脱。

浓缩富集时，可将乙酸乙酯萃取与大孔树脂分离相结合，比如提取所用溶剂为低乙醇浓度时可采用水洗至澄清后2～4倍柱体积的20％乙醇分别洗脱除杂，然后用2～4倍柱体积40％乙醇溶液洗脱富集；或是先采用乙酸乙酯进行萃取3～5次，乙酸乙酯与黄芪黄酮粗提物的用量比为1∶1～3∶1，乙酸乙酯部分上大孔树脂用水至澄清后，用2～4倍柱体积40％乙醇溶液洗脱富集。

所述的大孔树脂为NKA12型大孔树脂。

洗脱收集时，采用薄层层析法(TLC)跟踪检测收集液，也可以采用其他方法如高效液相色谱法(HPLC)检测毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

步骤3)中甲醇重结晶进行数次，以5～7次为宜。

本发明步骤3)具体为：将富集液减压蒸干后，加热溶解于甲醇溶液中，然后静置8～12小时使析出沉淀，收集沉淀物并用甲醇重结晶5～7次，获得高纯度的毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。

本发明分离后的毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷通过与标准品对照，保留时间基本一致，结晶产物的电喷雾质谱结果表明，[M+H]⁺481，[M+H-glc]⁺283，与文献报道的毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷质谱数据完全一致，因此确认分离后的产物毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。