[发明专利]一种检测中国荷斯坦牛产奶性状的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测中国荷斯坦牛产奶性状的方法及试剂盒。

背景技术

二十世纪末以来，世界卫生组织把人均乳品占有量列为衡量一个国家人民生活水平的主要指标。据最新资料表明，世界人均占有奶量保持在100kg(2006)左右，其中发达国家大多超过200kg(法国达到456kg)，日本在不长时间内已从不到10kg上升到现在的70kg，邻近的泰国、印度等也都超过60kg，而我国目前仅为6.8kg，是世界平均水平的1/15。

我国人均奶产品的占有量之所以远低于世界平均水平，除了受传统饮食习惯和其它一些因素的影响外，最主要的原因是我国的奶牛产业还不发达，尤其是奶牛育种水平还比较落后。因此需要加大对奶牛生产育种方面的科研投入，以提高奶业生产效率。

伴随着遗传学理论的发展，奶牛育种技术也从表型值选择发展到育种值选择。尤其是分子数量遗传学的产生及其理论和技术的发展为动物育种提供了新的策略，使动物育种学家从操纵数量性状表型逐步过渡到操纵数量性状基因型，从由表型的选择转为标记辅助选择(Marker-Assisted Selection，MAS)(Soller andBeckmamn，1983)，最终实现了分子育种。标记辅助选择是在基因组分析的基础上，通过DNA标记技术对畜禽数量性状座位进行直接选择，或通过标记辅助渗入导入有利基因，通过标记辅助淘汰清除不利基因等，从而达到更有效地改良畜禽的目的。

牛奶中的脂类主要是甘油三酯(triglycerides)，占乳脂肪的98％。合成甘油三酯的最主要途径是甘油磷酸二酯途径。二酰甘油转酰基酶(acylCoA：diacylglycerol acyltransferase)是甘油磷酸二酯途径的最后一步反应中催化甘油三酯合成的关键酶，所以二酰甘油转酰基酶的编码基因DGAT1对乳脂的合成有重要影响。因此，将DGAT1基因作为数量性状来研究其与生长性状和产奶性状的关系对牛的育种有很大的实践意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测中国荷斯坦牛产奶性状的方法。

本发明所提供的检测中国荷斯坦牛产奶性状的方法是检测中国荷斯坦牛自GenBank Accession No.AJ318490中自5′端第10433-10434位(即DGAT1外显子8的第15-16位)脱氧核糖核苷酸是AA还是GC，确定所述中国荷斯坦牛的基因型，然后通过基因型确定产奶性状；

其中，所述基因型是按照如下方法确定的：如果自GenBank Accession No.AJ318490中自5′端第10433-10434位(即DGAT1外显子8的第15-16位)脱氧核糖核苷酸是AA，其纯合体的基因型为KK；如果自GenBank Accession No.AJ318490中自5′端第10433-10434位(即DGAT1外显子8的第15-16位)脱氧核糖核苷酸是GC，其纯合体的基因型为MM；它们的杂合体基因型为KM。

当所述产奶性状为产奶量时，MM基因型个体的产奶量高于KM基因型个体和KK基因型个体，KM基因型个体高于KK基因型个体；所述产奶性状为乳脂量时，KK基因型个体的乳脂量高于KM基因型个体和MM基因型个体，KM基因型个体高于MM基因型个体；所述产奶性状为乳蛋白量时，MM基因型个体的乳蛋白量高于KM基因型个体和KK基因型个体。

在实际应用中，本发明方法确定的产奶性状可作为中国荷斯坦牛育种的辅助选择标记。

本发明中所述检测中国荷斯坦牛自GenBank Accession No.AJ318490中自5′端第10433-10434位(即DGAT1外显子8的第15-16位)脱氧核糖核苷酸是AA还是GC的方法具体可为先PCR扩增含有自GenBank Accession No.AJ318490中自5′端第10433-10434位(即DGAT1外显子8的第15-16位)核苷酸的基因组片段，然后对扩增产物进行测序或者用限制性核酸内切酶CffI酶切扩增产物。其中，PCR扩增的一对引物中，一个引物的核苷酸序列是序列表中序列1，另一个引物的核苷酸序列是序列表中序列2。

其中，用限制性核酸内切酶CffI酶切所述PCR扩增产物，若只得到201bp片段，其基因型为KK纯合体；若得到201bp、178bp及23bp三个酶切片段，其基因型为KM杂合体；若得到178bp和23bp两个片段，其基因型为MM纯合体。

本发明的另一个目的是提供一种试剂盒。