[发明专利]一种培养磁细菌生产磁小体的最适溶氧控制方法

权利要求书

1.一种培养磁细菌生产磁小体的方法，其包括如下步骤：将活化后的种子培养液接种到含有灭菌发酵培养基的发酵罐中，所述灭菌培养基的初始溶氧为100％饱和溶氧，调节pH至6.5～7.5，搅拌转速为发酵罐额定最高转速的0.05-0.15倍，通气量为发酵罐最小通气量的1-10倍，培养温度为25～35℃，通过补料的方式保证细胞生长不受营养的限制，以细胞生长速度变慢作为溶氧达到并低于细胞生长临界溶氧的信号，通过控制转速和/或通气流速使溶氧始终处于细胞生长临界溶氧，所述磁细菌为磁螺菌(M.gryphiswaldense)MSR-1，所述细胞生长速度为v＝ΔOD/Δt，当单位时间内的细胞光密度增量变小时表示细胞生长变慢，所述补料的方法是根据公式ΔOD₅₆₅/Δ[Na-lac]＝0.52±0.20，进行流加补料，碳源为乳酸或乳酸盐，其浓度控制在不少于0.016g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当细胞生长变慢时，调节转速至原转速的1.1～2倍和/或调节通气流速为原通气流速的1.1～6倍。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基含有碳源、氮源和铁源，其碳氮比为3∶1～30∶1，pH值为6.5～7.5；碳源为乳酸或乳酸盐溶液，其浓度范围为0.03～10.4g/L；氮源为氨盐或硝酸盐；铁源为可溶性的铁盐，铁源与碳源质量浓度比为0～1∶50。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述碳源为乳酸钠；所述氮源为氯化铵；所述铁源为柠檬酸铁。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，补料用培养基为含有碳源、氮源和铁源的液体培养基，其碳氮比为3∶1～30∶1，铁源与碳源质量浓度比为1∶20～1∶200，pH值为5.5～7.0。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，种子培养液的制备 方法是：在含有碳源、氮源和铁源的培养基中振荡培养磁细菌，获得种子培养液，其中所述培养基中碳氮比为3∶1～30∶1，pH值为6.5～7.5；碳源为乳酸或乳酸盐溶液，其浓度范围为0.03～10.4g/L；氮源为氨盐或硝酸盐；铁源为可溶性的铁盐，铁源与碳源质量浓度比为0～1∶200。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述碳源为乳酸钠；所述氮源为氯化铵；所述铁源为柠檬酸铁。

8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，细胞生长后期，当磁小体增加速度慢于细胞增长速度时不再增加转速或通气流速，以吸收利用铁元素的速度v＝Δ[Fe]/Δt表示磁小体的增加速度，细胞增长速度为v＝ΔOD/Δt，当Δ[Fe]/ΔOD变小时表示磁小体增加速度慢于细胞增长速度。

9.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，最终转速控制在初始搅拌速度的2～5倍，最终通气流速控制在初始通气流速的3～10倍。

10.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，当细胞密度OD₅₆₅达到5～10时不再增加转速和通气流速。

11.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所通气体为经过滤除菌的空气。