[发明专利]一种胡萝卜子转脂多肽制备方法和应用

权利要求书

1.一种胡萝卜子转脂多肽的制备方法，其特征在于采用提取、分离、纯化从胡萝卜子中制备转脂多肽，具体操作按下列步骤进行；

a、将胡萝卜子用液氮冰冻研磨进行细胞破碎；

b、利用pH 6.8-8.5磷酸钠缓冲溶液提取胡萝卜子总蛋白、离心，剃度季氨盐沉淀、离心，脱盐、离心得到胡萝卜子总多肽，提取温度为0-15℃，时间30min-5h；

c、将胡萝卜子总多肽进行热处理，温度50-100℃的水浴中处理5-50分钟，离心分离热不稳定的多肽，得到热稳定性总多肽；

d、胡萝卜子总多肽应用阴离子交换色谱方法分离总阴离子多肽；

e、胡萝卜子总阴离子应用阳离子交换色谱方法得到总阳离子多肽；

f、胡萝卜子总阳离子多肽脱盐，冷冻干燥得到总多肽粉。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤b胡萝卜子总蛋白质利用分子量限制在1000Da透析袋进行脱盐。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤b利用低温离心机离心除去沉淀，专速为200-12000prm，4℃，离心1-60分钟。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤d利用纤维素二乙基氨乙基-SN-23阴离子交换柱层析，在pH 7.1-9.0缓冲溶液分离阴离子性多肽。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤e利用羧甲基纤维素TSK-650M阳离子交换柱层析，在pH 4.0-6.8缓冲溶液得到胡罗卜子总阳离子多肽。

6.根据权利要求1所述的制备方法获得的胡萝卜子转脂多肽，其特征在于通过高效液相色谱分离得到分子量为9624的抗棉花枯萎病的转脂多肽。

7.根据权利要求1所述的制备方法获得的胡萝卜子转脂多肽，其特征在于通过Edman降解法确定其部分N-端氨基酸序列为：N-异亮氨酸-丝氨酸-半胱氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-苏氨酸-丝氨酸-丝氨酸-异亮氨酸。

8.根据权利要求1所述的制备方法获得的胡萝卜子转脂多肽作为制备药品、保健食品、食品、抗氧化剂或药品增效剂的用途。

9.根据权利要求1所述的制备方法获得的胡萝卜子转脂多肽作为制备植物转基因抗病原体的用途。