[发明专利]选择性封闭肿瘤STAT3的新型溶瘤腺病毒构建体的获得及用途

权利要求书

1.一种重组腺病毒构建体，其技术特征在于：

该重组腺病毒构建体称为Ad5/ΔE1/ΔADP/ASSTAT3，该构建体是在野生型Ad5的基础上缺失了其第920-946 nt GAT CTT ACC TGC CAC GAG GCT GGC TTT，该序列编码Ad5E1A蛋白的121至129位氨基酸，同时缺失E3区位于ADP基因中的第29477-29714nt，在该缺失区域引入一个ClaI酶切位点；利用该酶切位点反向插入770bp的外源性STAT3 cDNA片段，该片段相当于STAT3 mRNA的第960-190nt，其它基因组结构与野生型Ad5完全相同。

2.制备权利要求1所述的重组腺病毒构建体的方法，其特征在于：

用PCR扩增定点缺失技术分别缺失包含腺病毒21nt至5790nt序列的pXC1质粒中E1A的编码区920-946nt，序列为GAT CTT ACC TGC CAC GAG GCT GGC TTT，组成新的载体Δ920-946pXC1，Δ920-946pXC1质粒与穿梭载体pBHGE3共转染293细胞，筛选出表达E1A突变体功能蛋白的重组腺病毒构建体Δ920-946Ad5；采用PCR扩增定点缺失技术缺失Ad5 E3区29477-29714nt，并在上述缺失区域引入一个ClaI酶切位点，组成新的载体pCDNA3.1-ΔADP，在ClaI酶切位点处反向插入770bp的外源性STAT3 cDNA片段，该片段相当于STAT3 mRNA的第960-190nt，组成新的载体pCDNA3.1-ΔADP/ASSTAT3；提取Δ920-946 Ad5 TP-DNA，用EcoRI酶切，与用EcoRI酶切出的载体pCDNA3.1-ΔADP/ASSTAT3片段共转染293细胞，筛选出表达E1A突变体的重组腺病毒构建体Ad5/ΔE1/ΔADP/ASSTAT3。

3.权利要求1所述的重组腺病毒构建体在制备用于肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌及成骨细胞瘤治疗的药物中的应用。

4.权利要求1所述的重组腺病毒构建体在制备基因治疗载体中的用途。