[发明专利]一种从红乳菇子实体中提取分离红乳菇素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从红乳菇子实体中提取红乳菇素(rufuslactone)的方法。 

背景技术

化合物红乳菇素(rufuslactone)对多种植物病原菌有显著抑制活性，尤其对病原菌Alternaria brassicae菌丝生长抑制作用与市场上销售的抗菌剂carbendazim活性相当。(参考文献：D.Q.Luo，F.Wang，J.K.Liu.，Rufuslactone，anew antifungal sesquiterpene from the fruiting bodies of the basidiomycete Lactariusrufus.J.Antibiot.，2005，58(7)，456.)其化学结构如下式(I)： 

结构式(I) 

鉴于该化合物抗植物病原菌方面表现出的很好活性，将红乳菇素(rufuslactone)开发成防治植物病原菌的新型环保型农药的工作有进一步深入研究的价值。 

红乳菇(Lactarius rufus)属乳菇属高等真菌，菌盖直径5-8厘米，表面暗红色，扁球形。菌肉淡红色，乳汁白色，不变色，味苦辣。菌柄圆柱形，与菌盖同色，基部有细绒毛，中空。此菌夏秋针阔叶林地上散生或群生，与树木形成菌根。该菌主产于四川、云南等地。文献报道从该菌中分离得到一系列五元环内酯型乳菇烷型倍半萜，它们味道苦涩，推测在化学防卫中起到重要作用。 

目前，仅有文献D.Q.Luo，F.Wang，J.K.Liu.，Rufuslactone，a new antifungalsesquiterpene from the fruiting bodies of the basidiomycete Lactarius rufus.J.Antibiot.，2005，58(7)报道了黑褐乳菇含有对多种植物病原菌有显著抑制活性的化合物红乳菇素(rufuslactone)，且文献中红乳菇素(rufuslactone)的提取方法不完善，且根据该方法无法得到红乳菇素(rufuslactone)纯品。 

发明内容

本发明的目的是提一种从红乳菇子实体中提取抗植物病原菌化合物红乳菇素(rufuslactone)的方法。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种从红乳菇子实体中提取分离红乳菇素的方法，该方法按以下步骤进行： 

(1)将红乳菇子实体干燥后粉碎，以甲醇室温浸泡提取，得到甲醇提取液。 

(2)将甲醇提取液以氯仿-水系统分配萃取，回收氯仿，得到萃取液，将萃取液转入硅胶柱，然后以石油醚-丙酮系统梯度洗脱，收集洗脱液。 

(3)将步骤2得到的洗脱液转入凝胶柱，以甲醇-氯仿系统洗脱，以薄层层析检测洗脱液，合并洗脱液中的主要组分得到红乳菇素纯品。 

本发明方法在步骤1中用甲醇室温浸泡时间为24～48小时。在步骤2中，用氯仿-水系统萃取甲醇提取液时，氯仿与水的体积比为6∶4～4∶6，得到萃取液，将萃取液转入硅胶柱，然后以石油醚-丙酮系统洗脱时，石油醚与丙酮的体积比为8.5∶1.5～7∶3，洗脱液流速为1～5ml/min。在步骤3中，将步骤3得到的洗脱液转入凝胶柱，用甲醇-氯仿系统洗脱凝胶柱时，甲醇与氯仿的体积比为1∶1～1∶0。 

采用本发明所述的技术方案可以为将红乳菇素(rufuslactone)开发成防治植物病原菌感染的新型环保型生物农药并解决其原料来源问题，该技术具有提取时间短、原料分离程序简单易行、产量大、易于规模化生产等优点。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的内容并不局限于此。 

实施例1 

首先将200g干燥的红乳菇子实体粉碎，以甲醇室温浸泡提取24小时，得到甲醇提取液18g。 

然后将甲醇提取液以氯仿/水分配萃取，V(氯仿)∶V(水)＝6∶4，回收氯仿，得到萃取液7g，将萃取液转入硅胶柱，然后以V(石油醚)∶V(丙酮)＝8.5∶1.5洗脱液梯度洗脱，洗脱液流速为1ml/min，收集洗脱液，洗脱液重0.5g。 

最后将上述步骤得到的洗脱液转入凝胶柱，以V(甲醇)∶V(氯仿)＝1∶1的洗脱液洗脱，以薄层层析检测洗脱液，合并洗脱液中的主要组分得到红乳菇素纯品200mg。 

实施例2 

首先将500g干燥的红乳菇子实体粉碎，以甲醇室温浸泡提取28小时，得到甲醇提取液40g。