[发明专利]一种与水稻抗条纹叶枯病基因连锁的分子标记

说明书

技术领域

本发明涉及一种与水稻条纹叶枯病抗病基因相连锁的分子标记，可应用于分子标记辅助育种，属于水稻抗病育种和分子生物学领域。

背景技术

水稻条纹病毒(RSV)引起的水稻条纹叶枯病最早于1897年在日本关东发现，后在朝鲜、乌克兰和中国均有发生。我国自1962年在江浙发现该病毒以来，已经在全国16个省、市、自治区发生，目前以江苏省为主的长江下游稻区仍处于流行期。据不完全统计，仅2004年江苏省水稻条纹叶枯病发生面积就达2700万亩，占江苏省水稻面积的79％，专家预计2006后的五年内水稻条纹叶枯病仍将呈偏重发生趋势，预防工作刻不容缓。

国外的防治经验表明，针对这一病害最经济而有效的方法是选用抗病品种。然而目前病区生产上使用的水稻品种大多以感病材料为主，品种抗性改良和大面积的品种更替势在必行。前人的研究水稻条纹叶枯病抗性有单基因和两对基因控制等遗传模式，而其中以来源于籼稻品种Modan的位于第十一染色体的Stv-bⁱ单基因控制的抗性表现最强，以该位点为抗病基因导入目标是当前首选的品种选育策略。目前水稻条纹叶枯病的研究者多借鉴日本60年代建立的室内鉴定方法，但该方法技术门槛高、费时费力的特点使其不适于抗病育种中大量材料的抗性初筛。另一方面水稻条纹叶枯病田间抗性鉴定往往表现出较差的稳定性和重复性。抗性鉴定方法的技术瓶颈也是导致水稻条纹叶枯病的抗病育种进展缓慢的重要原因。而近年来随着分子生物学的不断发展为复杂的抗病品种选育提供了新的思路，如邓其明等通过常规回交育种结合分子标记辅助选择技术将来自IRBB24的Xa21和Xa4两个抗白叶枯病基用聚合到感病的杂交稻恢复系绵恢725中，分子标记技术已成为辅助育种的重要手段。

武育粳3号是水稻条纹叶枯病病区推广面积最大的感病品种，其因为高产优质的栽培特性和口感优良的特点深受生产者和消费者的喜爱，是用于品种改良的最佳候选品种之一，而镇稻88是目前生产上使用的对条纹叶枯病抗性表现最为稳定的抗病品种，同时也是江苏省水稻品种区试中条纹叶枯病抗性鉴定试验的预设抗病对照，是理想的抗源材料，其中含有Stv-bⁱ(《江苏农业科学》2005，(5)：22-23)，以这两个品种及其衍生品种为亲本进行抗病品种的选育不仅可以克服籼粳亚种间杂交不育的缺点，而且由于其本身为主栽品种的特性可以加快选育进程，因此以这两个品种为材料筛选的抗性基因连锁标记，可望直接应用于抗病品种的选育，以提高选择效率和加快育种进程。

发明内容

本发明针对上述研究背景，以武育粳3号/镇稻88的F₂群体为作图群体，通过抗病性鉴定结果和SSR标记数据间的连锁分析，获得了与水稻条纹叶枯病抗性基因连锁的SSR标记RM229，该标记可应用于水稻条纹叶枯病抗病品种的辅助选择育种。

本发明所提供的与水稻条纹叶枯病抗性基因连锁的SSR标记RM229，是通过以下方法获得的：

1)以感病品种武育粳3号为母本，抗病品种镇稻88为父本，构建F₂定位群体，分单株收获F_2:3家系的种子用于抗性鉴定；

2)以SDS方法提取亲本、F₁及F₂代的DNA；

3)根据http://www.gramene.org相关信息合成SSR引物，PCR后采用8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，获得分子标记数据；

4)以携带水稻条纹病毒的灰飞虱为接种体，采用单分蘖接种鉴定方法，测定F₂植株抗病性，以发病与否区分为抗病和感病；

5)以携带水稻条纹病毒的灰飞虱为接种体，采用苗期接种鉴定方法，测定F_2:3株系抗病性，按发病率划分抗性水平，0-10％为抗病，10.1-30％为中抗，30.1％以上为感病；

6)结合4)和5)结果，确定F₂植株抗病性；

7)根据连锁遗传定律，按照MapmakerEXP3.0b软件的要求，将与父本镇稻88相同的带型赋值为“A”，与母本武育粳3号相同的带型赋值为“B”，与F₁代相同的带型赋值为“H”，带型不清楚或缺失的赋值为“一”，用Kosambi函数算出遗传距离。

与水稻条纹叶枯病抗病基因连锁的SSR标记RM229的应用包括：在以镇稻88及其衍生品种(系)与武育粳3号及其衍生品种(系)为亲本的杂交组合的后代单个水稻植株为对象，通过检测其RM229标记的带型数据，可以预测该植株对水稻条纹叶枯病的抗性。