[发明专利]5’-核苷酸酶诊断试剂盒及5’-核苷酸酶活性浓度测定方法

权利要求书

1.一种利用酶比色法及酶联法技术的5’-核苷酸酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：

核苷单磷酸+水 5核苷酸酶 核苷+磷酸根

磷酸根+草酰乙酸 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶

              二氧化碳+磷酸烯醇式丙酮酸+水

二氧化碳+乙酰辅酶A+还原型辅酶 丙酮酸脱氢酶

                          丙酮酸+辅酶A+辅酶

核苷单磷酸可以是：腺苷单磷酸、肌苷单磷酸、尿苷单磷酸等

将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出5’-核苷酸酶的活性浓度大小结果。

2.一种5’-核苷酸酶诊断试剂盒，主要成分包括：

缓冲液                      20——500mmol/L

稳定剂                      1——4000mmol/L

还原型辅酶                  0.1——0.35mmol/L

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶      1000——80000U/L

丙酮酸脱氢酶                1000——80000U/L

核苷单磷酸                  1——50mmol/L

草酰乙酸                    1——50mmol/L

乙酰辅酶A                   1——50mmol/L

试剂成分的浓度不一定只限于上述范围；在此范围内效果较好，在此范围外，试剂仍会反应作用。

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述5’-核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述5’-核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶组成。还原型辅酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A在试剂1或试剂2中的位置可以不限。

5.根据权利要求2所述5’-核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A组成多剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、丙酮酸脱氢酶组成；试剂3，由缓冲液、稳定剂、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶组成。还原型辅酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸脱氢酶、核苷单磷酸、草酰乙酸、乙酰辅酶A在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。

6.根据权利要求2所述5’-核苷酸酶诊断试剂盒，其特征在于：还包括稳定剂1—4000mmol/L或0.1％-100％体积比。所述稳定剂为：硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(PropyleneGlycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐剂中的至少一种。