[发明专利]一种通过微茎尖培养获得半夏脱毒苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过微茎尖培养获得半夏脱毒苗的方法。

背景技术

半夏(P.ternata)是我国特有的一种传统中药材，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结之功效。但是根据有关资料检测显示，在我国半夏普遍受到芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus，DsMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)的侵染，使病毒在植株中大量积累，抑制植株的正常生长，使其种质逐年衰退，从而严重影响了产量及品质的提高。对病毒病的防治，目前缺乏有效的防治药剂。

发明内容

本发明提供了一种通过微茎尖培养获得半夏脱毒苗的方法，它可以获得品质均一和无病毒侵染的半夏种茎。

本发明采用了以下技术方案：一种通过微茎尖培养获得半夏脱毒苗的方法，它采用如下步骤：步骤一，取泰半夏块茎，诱导出的营养芽，块茎用清水洗净在相应条件下直接催芽处理；步骤二，切取带芽块茎及珠芽用流水冲洗，然后进行外植体消毒；步骤三，取消毒后的带芽块茎，无菌条件下，在解剖镜下分别剥取茎尖分生组织接种于芽的分化培养基；步骤四，接种后于暗培养7d之后再转入光下进行正常培养。

本发明步骤一中泰半夏块茎的直径为1.0cm。本发明步骤一中的相应条件为温度为28±1℃，相对湿度80％。本发明步骤二中用流水冲洗的时间为60min。步骤二中外植体消毒方法为先用75％酒精处理30s，然后用无菌水冲洗3-4次，0.1％升汞同时滴加Tween-80至终浓度约0.1％，再振摇10min，无菌水冲洗6-8次，最后用10％的H₂O₂浸泡6min，无菌水冲洗4-5次。本发明步骤二中的分化培养基为以MS为基本的分化培养基，培养条件包括温度、光照，温度为25℃，光照度为200-400lx，每天光照16小时。本发明步骤三中茎尖分生组织的长度为0.2-0.5mm。本发明步骤三中的分化培养基采用MS为基本培养基，添加琼脂8g/L，蔗糖30g/L，调整pH值为5.8，121℃高压灭菌20分钟。本发明步骤三中解剖镜40x。本发明步骤四中正常培养条件为光照强度1500-2000lx，光照为12h/d，温度为25±1℃。

采用了以上技术方案后，通过组织培养脱除侵染半夏的主要病毒，可以获得品质均一、无(未检出)病毒侵染的半夏种茎，这是半夏新的优良品种(系)选育的基础。本发明应用组织培养技术脱毒，既清除植株营养体的病毒，并由已去除病毒的组织再生出无病毒植株，保证植株的正常生长，提高产量及品质，进一步扩大繁殖。

具体实施方式

本发明为一种通过微茎尖培养获得半夏脱毒苗的方法，它采用如下步骤：步骤一，取直径为1.0cm泰半夏块茎，诱导出的营养芽，块茎用清水洗净在温度为28±1℃，相对湿度80％的条件下直接催芽处理；步骤二，切取带芽块茎及珠芽用流水冲洗60min，进行外植体消毒，外植体消毒方法为先用75％酒精处理30s，然后用无菌水冲洗3-4次，0.1％升汞同时滴加Tween-80至终浓度约0.1％，再振摇10min，无菌水冲洗6-8次，最后用10％H₂O₂浸泡6min，无菌水冲洗4-5次，步骤二中的分化培养基为以MS为基本的分化培养基，培养条件包括温度、光照，温度为25℃，光照度为200-400lx，每天光照16小时；步骤三，取消毒后的带芽块茎，无菌条件下，40x解剖镜下分别剥取长度为0.2-0.5mm的茎尖分生组织接种于芽分化培养基，分化培养基采用MS为基本培养基，添加琼脂8g/L，蔗糖30g/L，调整pH值为5.8，121℃高压灭菌20分钟；步骤四，接种后于暗培养7d之后再转入光下进行正常培养，正常培养条件为光照强度为1500-2000lx，光照为12h/d，温度为25±1℃。