[发明专利]锂诊断/测定试剂盒及锂浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种锂诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定锂浓度的方法，属于医学/工业/环境检验测定技术领域。

背景技术

20世纪40年代，Cade首次用锂盐治疗躁狂症成功，总有效率约70％，锂盐对躁狂和抑郁的复发有预防作用，也用于治疗分裂情感性精神病。另外，锂盐可使双相障碍维持治疗阶段的自杀行为减少86％，而当停用锂盐后，自杀危险性会增加7.5倍。当血锂浓度达到或超过1.5mmol/L，会出现不同程度的中毒症状，血锂浓度3.0mmol/L以上可危及生命。

近几年，临床实验室多数方法学都有了新的发展，但锂的测定方法基本维持：火焰原子发射法、火焰原子吸收法及离子选择电极法。原子吸收的方法是将稀释的标本吸入乙炔火焰中，利用空心阴极元素灯光源发出被测元素的特征辐射光，为火焰原子化器产生的样品蒸汽中的待测元素基态原子所吸收。锂在波长670.8nm处的被吸光的特征辐射光的大小与标本中的锂浓度成正比。但目前国内的临床实验室没有统一的实验方法和实验操作规程，也很难在精神病医院的实验室中查找到其使用情况。

自然界中无游离锂，因此实际指锂离子或锂盐，而碳酸锂是最重要的锂化物。碳酸锂被用于陶瓷釉料的生产、特种玻璃、铝的熔炼和钢铁铸造粉末。氢氧化锂和氯化锂应用在润滑剂、空调和干燥系统中。丁基锂、锂金属、特种无机物和特种有机物，被用于制药、合成橡胶等领域。锂是一种稀有金属，锂电池就以它为主要原料，航空航天工业也离不开锂。金属锂与锂合金在核能发电、轻质高比强合金、轻金属焊接等诸多领域都有着广阔的开发利用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定锂浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的锂诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行锂浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明锂浓度测定方法原理如下：

肌醇-1-磷酸+水  肌醇-1-磷酸酶/Mg²⁺/Li⁺  肌醇+磷酸根

磷酸根+葡萄糖  葡萄糖-6-磷酸酶  葡萄糖-6-磷酸+水

葡萄糖-6-磷酸+辅酶  葡萄糖-6-磷酸脱氢酶

                葡糖酸内酯磷酸+还原型辅酶

这种方法应用能被锂抑制活性的肌醇-1-磷酸酶(inositol-1-phosphase；EC 3.1.3.25)酶(偶)联葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase；EC 3.1.3.9)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase；EC 1.1.1.49)酶促反应速率比色法。肌醇-1-磷酸酶(需要镁离子激活其活性，锂离子能抑制镁离子的激活作用)酶解肌醇-1-磷酸反应产生磷酸根，再通过(偶)联合葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，比较对照及锂样品吸光度上升的程度/速度的差别，可以测算锂的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明锂诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                          100mmol/L

稳定剂                          500mmol/L

辅酶                              3mmol/L

氯化镁                          0.6mmol/L

肌醇-1-磷酸酶                    10000U/L

葡萄糖-6-磷酸酶                  12000U/L