[发明专利]硒诊断/测定试剂盒及硒的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硒诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定硒浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。

背景技术

硒是生物必需的微量元素，植物硒是人类和动物获取硒的主要来源，人体过多的摄入硒能引起硒中毒。硒元素可使人体内的过氧化物分解，保护细胞膜、心、肾、肺、眼等；可清除人体的自由基，抗衰老，增强人体免疫功能，可抑制多种致癌物质，人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症。

结合国内外有关硒的各种检测方法.其中常用的测定方法：如原子吸收光谱法(AAS)、原子荧光光谱法(AFS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)等；原子吸收光谱(AAS)作为元素特效检测器与GC联用已成为微量元素分析的主要方法。另外还有，应用液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)鉴定硒化合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用硒依赖性的酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400—700nm波长处吸光度的上升，得以测定硒浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的硒诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行硒浓度测定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明硒浓度测定方法原理如下：

谷胱甘肽二硫+2水  谷胱甘肽过氧化物酶/Se

                             2谷胱甘肽+过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合  过氧化物酶  吲嗒胺色原或

                                   醌亚胺色原+水

这个方法利用硒依赖性的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase；EC1.11.1.9)偶联过氧化物酶(peroxidase；EC1.11.1.7)酶促反应速率比色法。谷胱甘肽过氧化物酶酶解谷胱甘肽二硫反应产生过氧化氢，在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400—700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处，测定染料—吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)—含量高低的光吸收大小；通过测量400—700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的程度/速度，得出硒浓度大小测定结果。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分关系的本发明硒诊断/测定试剂盒较为理想：

缓冲液                          100mmol/L

稳定剂                          500mmol/L

过氧化物酶                       30000U/L

谷胱甘肽过氧化物酶               10000U/L

谷胱甘肽二硫                     10mmol/L

还原型色原体组合                 0.1——20mmol/L

所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基—N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-双乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-双氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

双甲基苯胺