[发明专利]钠(离子)诊断/测定试剂盒及钠(离子)浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种钠(离子)诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定钠(离子)浓度的方法，属于医学/食品检验测定技术领域。

背景技术

血清中钠离子含量(简称“血钠”)在临床上有着非常重要的意义，医学上有三个决定水平，依次为：水平1——115mmol/l，水平2——135mmol/l，水平3——150mmol/l。当患者血钠浓度等于或低于水平1时，可出现神志不清、疲劳、恶心、头痛、呕吐和厌食等症状，表明机体内水的比例大于钠，应采用相应治疗措施；当血钠浓度低于水平2时，应查找低钠血症的原因，进一步测定血清渗透压、血钾并进行尿液分析，以确定诊断；当血钠浓度高于水平3时，应检查其它试验项目，寻找导致高钠血症的原因。

现有技术中测定钠离子含量的常用方法有：火焰光度计法、离子选择电极法、化学测定法、原子分光光度法、酶动力学法等。

火焰光度计法——1950年开始使用并一直沿用至今，可检测血清、尿液、脑脊液及胸腹水中的Na⁺和K⁺，是一种发射光谱分析法，其结果准确可靠，广为临床采用。该方法分为内标准法和外标准法两种。外标准法操作误差较大，一般不采用。现在主要使用内部标准法，即向标本及标准液中加进相同浓度的内部标准元素锂或铯进行测定，操作时，将含锂的溶液作为稀释液，同时测定K⁺、Na⁺和Li⁺的浓度，以标本与标准液的Na⁺/Li⁺与K⁺/Li⁺比值，计算Na⁺、K⁺浓度。由于血清稀释倍数大，血清蛋白质粘性的影响几乎可以忽略不计。

离子选择电极法——简称ISE法，是采用灵敏的特定专用电极，在专用仪器上进行血清和尿等体液中的K⁺、Na⁺的测定，因标本用量少，快速准确，几乎有取代其它方法的趋势。其测定原理是，用离子选择电极与参比电极组合起来，浸泡在待测标本溶液中进行检测。目前已有的电极种类有：①玻璃膜电极，感应材料为玻璃薄膜，有PH电极、K⁺电极和Na⁺电极；②固相膜电极，由难溶性金属物质加压成型，以固体膜或单日膜作为感应膜，有Cl-电极和F-电极；③液态膜电极，将环氧树脂或内装聚氯乙稀作为感应膜，有Ca²⁺电极；④用缬氨霉素膜制成的K⁺电极。上述电极均有一定的使用寿命，因为电极使用一段时间后就会自动老化，有效期长短不一。目前离子选择电极法应用也较为普遍，但是电极成本昂贵。

此外，化学测定法主要利用复环王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，作为离子载体进行测定。由于大环结构内有空穴，分子内部的氧原子有未共用电子对可与金属离子结合，根据空穴大小，可选择性结合不同直径的金属离子，从而达到测出离子浓度的目的；原子分光光度法也可用于检测血清中K⁺、Na⁺，但操作繁杂，误差较大，不及火焰光度法简便。

酶法测定钠离子含量的方法，与火焰光度计法或离子选择电极法都有较好的一致性，这种方法抗干扰性强、稳定性好，但用生化分析仪不能同时测定钠离子和钾离子各自的含量，导致这种方法不能得到推广应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶循环扩增法(EnzymaticRecycling Method)、酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定钠(离子)浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的钠(离子)诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行钠(离子)浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明钠(离子)浓度测定方法原理如下：

乳糖+水 β-半乳糖苷酶/Na⁺ 葡萄糖+半乳糖

葡萄糖+磷酸根 葡萄糖-6-磷酸酶 葡萄糖-6-磷酸+水

葡萄糖-6-磷酸+辅酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 葡糖酸内酯磷酸+