[发明专利]钾(离子)诊断/测定试剂盒及钾(离子)的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种钾(离子)诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定钾(离子)浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。

背景技术

肾小球疾病、肾功能衰弱、糖尿病酮症中毒、肾上腺皮质功能减退等。当血钾高达7.5mmol/L或以上时病人将出现心律失常，应考虑确定适当的治疗方案。血清钾超过10mmol/L时，即可发生心室纤颤，心脏停搏而死亡。高钾使心脏停跳于舒张期。

目前钾测定常用的方法有：同位素稀释质谱法、中子活化法、火焰光度计法、化学测定法、离子选择电极法、原子分光光度法、酶动力学法。

火焰光度法1950年开始使用并一直沿用至今的火焰光度法检测血清、尿液、脑脊液及胸腹水的Na⁺和K⁺，是一种发射光谱分析法。测定方法分为内标准法和外标准法两种。外标准法操作误差较大，一般不采用。现在主要使用内部标准法，即标本及标准液采用加进相同浓度的内部标准元素锂或铯进行测定。操作时，将含锂的溶液作为稀释液，同时测定K、Na和Li的浓度，以标本与标准液的Na/Li与K/Li比值，计算Na、K浓度。由于血清稀释倍数大，血清蛋白质粘性的影响几乎可忽略不计。

化学测定法主要利用复环王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，亦称为冠醚，均为离子载体进行测定，由于大环结构内有空穴，分子内部氧原子有未共用电子对可与金属离子结合，根据空穴大小，可选择性结合不同直径的金属离子，从而可达到测出离子浓度的目的。测定血清K，一般采用普通冠醚阴离子染料进行比色定量。

离子选择电极法ISE法是采用灵敏的特定专用电极，在专用仪器上进行血清和尿等体液的K⁺、Na⁺的测定，因标本用量少，快速准确，几乎有取代其他方法的趋势。其仪器测定原理是离子选择电极与参比电极组合浸泡在待测标本溶液中，进行检测。目前已有的电极种类为：①玻璃膜电极，感应材料为玻璃薄膜的有pH电极、K⁺电极和Na⁺电极；②固相膜电极，由难溶性金属物质加压成型，以固体膜或单日膜作为感应膜的电极有Cl^-电极和F^-电极；③液态膜电极，将环氧树脂或内装聚氯乙稀为感应膜的Ca²⁺电极；④用缬氨霉素膜制成的K⁺电极。上述电极均有一定的寿命，因为电极使用一段时间就会自动老化，有效期长短不一。

原子分光光度法原子分光光度法可用于检测血清K+、Na+，操作繁杂，误差较大，不及火焰光度法简便。

钾测定的决定性方法是同位素稀释质谱法及中子活化法。WHO推荐的方法是火焰光度计法。目前离子选择电极法应用较为普遍，但是电极成本昂贵。

酶测定法和火焰光度计法或离子选择电极法均有较好的一致性，且抗干扰性强，稳定性好，弥补了生化分析仪不能同时测定钾钠的不足。有较好的分析性能，易于自动化，在临床化学分析中必定取代火焰光度计法成为常规分析项目。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定钾(离子)浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的钾(离子)诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行钾(离子)浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明钾(离子)浓度测定方法原理如下：

色氨酸+水  色氨酸酶/K⁺  丙酮酸+氨离子+吲哚

丙酮酸+辅酶A+氧  丙酮酸氧化酶  过氧化氢+二氧化碳+

                                        乙酰辅酶A

二氧化碳+酮戊二酸+还原型辅酶  异柠檬酸脱氢酶  异柠檬酸

                                               +辅酶