[发明专利]制备抗独特型抗体的方法

说明书

单克隆抗体(MAb)治疗在癌症、自身免疫疾病、移植排斥和其他病症治疗中的应用在最近几年日益广泛。特别是分子工程技术可将鼠类MAb转变为人源化或完全的人类分子，由此在患者治疗中减少针对该治疗剂的不良免疫反应(人抗人抗体＝HAHA)。因此，用治疗性MAb的成功治疗事件显著增加，这主要是因为治疗性MAb减少或消除了免疫原性，增加了血清半衰期，并且提高了效应子功能。在这种情况下，开发出易于从所治疗患者血清中的内源IgG分子库中鉴别出治疗性免疫球蛋白(IgG)的合适分析方法显得极为关键。因此，需要对临床给予治疗性MAb进行药物代谢动力学分析、药物动力学分析、生物分布分析以及免疫应答诱导分析的工具。抗独特型抗体(抗-ID抗体)特异性结合其他抗体的可变区，因此可用于在药物代谢动力学研究中检测治疗性MAb，并且在治疗个体中有助于定量人抗人抗体(HAHA)反应。目前，这类抗独特性抗体是通过用目的治疗性抗体免疫实验动物，然后对独特型结合MAb的存在进行筛选而制备的。遗憾地是，治疗性MAb在实验动物中引发的免疫应答主要针对人抗体Fc部分，由此抗独特型抗体稀少且难以获得。而且，通过多克隆血清的亲和纯化方法从动物产生抗独特型抗体有许多不足，例如高百分比非独特型结合抗体、对正常免疫球蛋白低产量免疫吸附，以及每批制备物质量存在差异。

因此，本发明提供了转基因非人动物在制备目的抗体的抗独特型抗体中的应用，其中该非人动物为外源抗体转基因动物，其中该目的抗体与该外源抗体具有相同同种型。

这类外源抗体转基因动物表现出对与该外源抗体所有相同的同种型抗体Fc部分的耐受性，由此允许对该外源抗体相同同种型抗体的可变区进行免疫应答，从而产生不同的独特型抗体。

EP05105946.7中已记载外源抗体非人转基因动物。然而，其没有公开本文中记载的应用。

具体地，本发明提供了一种制备抗独特型抗体的方法，其包括：

a)产生外源抗体的转基因非人动物，

b)利用该转基因非人动物诱导针对目的抗体的免疫应答，目的抗体借此与外源抗体具有相同种类的特异性同种型，以及

c)由此产生直接针对目的抗体独特型部分的抗体。

优选地，该方法进一步包括另一步骤d)分离该抗独特型抗体。分离抗体的方法，特别是分离来自体液(例如血液)的抗体的方法为本领域已知。更优选地，纯化抗独特型抗体。合适的纯化方法是本领域技术人员已知的。

本文所用的术语“外源抗体”是指含有源自来源生物(例如人类)恒定区的抗体，将该抗体的编码DNA导入宿主生物(例如小鼠)，由此该宿主生物表达该抗体。来源生物与宿主生物不属于林奈分类系统同一物种。物种为一组实质或潜在的远交种群(interbreeding population)。

外源抗体可以为治疗性抗体。优选地，外源抗体为人类、人源化或嵌合抗体，其中至少嵌合抗体恒定区为人源的。更优选地，外源抗体为免疫球蛋白G(IgG)。进一步优选地，抗体为抗人淀粉状蛋白β肽或其变体的抗体。最优选，抗体为抗AβIgG1。抗AβIgG1在专利申请WO 03/070760中有详细记载，其内容在此整体并入作为参考。

本文所用的术语“变体”或“抗体变体”是指结构特性、制备方法、配制或存储条件与标准抗体不同的抗体。结构变体可包括一级蛋白质结构、二级蛋白质结构和三级蛋白质结构改变(即构象改变)，糖基化改变以及氨基酸化学修饰的改变。进一步地，结构变体为改变的结构域间构建体(VL/VL，VH/VH)、二聚体、寡聚体以及较大的聚集体。

本文所用的术语“目的抗体”是指其恒定区与外源抗体恒定区属于相同同种型的抗体。

抗体为“Y”形分子，其由两条重链和两条轻链组成。重链与轻链都有不同的型和亚型。每重链和每轻链都有恒定区和可变区，其中重链恒定区体积较大。

术语“恒定区”或“C区”是指这样的抗体分子区，该区域与相同物种生物产生的不同特异性抗体的相应区域几乎完全相同。恒定区在相同种类抗体(同种型)中恒定，其负责特定免疫球蛋白亚类的效应子功能。Fc片段是指木瓜蛋白酶裂解抗体所产生的抗体片段，其包括大部分的恒定区。