[发明专利]以肽为基础的治疗动脉粥样硬化的免疫疗法

说明书

技术领域

本发明涉及新肽，特别涉及用于对动脉粥样硬化进行免疫治疗以及用于以肽为基础的ELISA检测中的肽，所述ELISA检测用于确定针对氧化低密度脂蛋白的免疫反应，以及诊断有无动脉粥样硬化的存在。

特别地，本发明包括：

1)表1中所列的任一种肽在免疫疗法或“抗动脉粥样硬化疫苗”中的应用，所述肽以天然或经MDA修饰的形式单独或联合使用，优选与适当的载体和佐剂同时使用，用于预防和治疗缺血性心血管疾病。

2)上述肽在ELISA中的应用，用于检测与缺血性心血管疾病发生危险性升高或降低有关的抗体。

技术背景

动脉粥样硬化是一种引起大、中动脉的最内层(内膜)变厚的慢性疾病。该疾病使得血流速度减慢，可以导致由受影响的血管供血的器官发生缺血和组织损伤。动脉粥样硬化是心血管疾病发生的主要原因，包括心肌梗塞、中风、外周动脉疾病。该疾病是西方国家的主要死亡原因。预计在二十年内，该疾病将成为全世界的首要死因。

该疾病是由脂蛋白在血管的细胞间质累积所引起的，主要是低密度脂蛋白(LDL)。这些LDL颗粒聚集在一起，并经过氧化修饰。氧化后的LDL具有毒性，导致血管损伤。在许多方面，动脉粥样硬化表现为对所述损伤的一种反应，包括炎症和纤维化。

1989年，Palinski及其同事发现人类中存在着抗氧化LDL的循环自身抗体。该发现提示了动脉粥样硬化可能是一种由抗氧化脂蛋白的免疫反应所引起的自身免疫性疾病。在此期间，有多个实验室开始寻求抗氧化LDL的抗体滴度与心血管疾病之间的关系。然而，这些研究所提示的结果并不是很清楚。所存在的抗氧化LDL的大量不同抗原决定基的抗体，以及这些抗原决定基的结构并不清楚。因此，术语“氧化LDL抗体”是指尚不知晓的不同抗体的混合物，而不是某一个特定的抗体。T细胞非依赖性IgM抗体比T细胞依赖性IgM抗体更加多一些。

心血管疾病的患者以及健康对照人群中均存在着抗氧化LDL的抗体。尽管之前有一些研究报道抗氧化LDL的抗体滴度和心血管疾病之间存在着联系，但是其它研究并没有发现这样的关系。这些研究的一个重要缺陷在于，它们所采用的确定抗体滴度的ELISA方法中将氧化LDL颗粒作为配体。在不同的个体中，LDL的构成不同，控制和评价氧化修饰的程度较为困难，也不能确定氧化LDL颗粒中针对不同抗原决定基的抗体水平。在一定程度上，由于技术问题，使用现有技术评价抗氧化LDL的抗体的作用是非常困难的。然而，如果使用完整的氧化LDL颗粒，从而产生明确的并可以复制的疫苗组份也不是不可能的事情。

研究针对血管壁上氧化LDL的自身免疫反应在动脉粥样硬化中所起的作用的另一种方法，是用自体氧化LDL免疫动物。该方法所基于的思想是，通过采用经典的免疫技术，如果抗氧化LDL的自身免疫反应得到了增强，那么，其将导致血管炎症加剧以及进行性的动脉粥样硬化。为了验证该假设，用同源氧化LDL免疫兔子，然后给所述动物喂食3个月的高胆固醇饮食从而诱导动脉粥样硬化。

然而，与原有假设相反的是，用氧化LDL进行免疫具有保护性效应，使动脉粥样硬化减少了50％左右。在随后的实验中，我们给予动物高胆固醇饮食以及血管气球损伤从而导致更严重的斑块形成，但是，我们观察到了与上述类似的结果。与我们的研究相一致的是，其它多个实验室也报道了类似的观察结果。结合现有资料清楚地表明，存在有防止动脉粥样硬化形成和发展的免疫反应，这些反应中包括抗氧化LDL的自身免疫反应。

上述观察结果同时还提示了在人类中有可能研究出治疗由动脉粥样硬化所引起的心血管疾病的免疫疗法或“疫苗”。其中一种方法就是将个体自身的LDL先暴露于例如铜等物质进行氧化，然后用该氧化了的自身LDL免疫所述个体。然而，该方法还存在这样一个问题，那就是目前仍然不知道是何种氧化LDL结构诱导了保护性的免疫反应，以及氧化LDL是否也含有抗原决定基，从而会引起不良的免疫反应。

确定氧化LDL的抗原决定基是非常重要的，其原因如下：

首先，一个或多个上述抗原决定基可能是激活抗动脉粥样化免疫反应的原因，在用氧化LDL免疫的动物中观察到了该免疫反应。因此，含有这些抗原决定基的肽意味着在人类中研究出免疫疗法或“动脉粥样硬化疫苗”的可能性。进一步地，这些肽可以用于治疗人类的动脉粥样硬化。