[发明专利]一种新型草坪草种质的创制方法及产品

权利要求书

【权利要求1】一种新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：包括下列步骤：

A.愈伤诱导：黑麦草系列草坪草成熟种子切去部分胚乳，用75％酒精浸泡40-50s，再用0.1％HgCl2浸泡2-5min，用无菌水清洗4-6次，吸干水分接于诱导培养基上，每18-23天继代一次；

B.浸染及筛选：挑取含有表达载体pBinAipt-bar的农杆菌EHA105菌落，在含50mg/L卡那霉素和20mg/L利福平的YEP培养基中26-30℃震荡培养至菌液OD600值为0.5-0.7时收集菌体，用MS重悬培养基重悬菌体；挑选鲜嫩的愈伤于菌体重悬液中浸泡12-18min，用无菌滤纸吸干菌液接于共培养基上，48-72小时后转入含除草剂4.5-5.5mg/L的筛选培养基上，保持选择压继代1-3次；

C.分化、生根、移栽：将在筛选培养基上存活下来的愈伤组织接于分化培养基上，分化的幼苗长至2-3cm时转移至生根培养基中培养，待苗长至5-10cm时打开瓶盖，炼苗3-5d后移植到土壤中。

【权利要求2】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：A步骤中所述诱导培养基中含有1.8-2.2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸。

【权利要求3】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：B步骤中所述的MS重悬培养基中含有95-105mg/L乙酰丁香酮和18-22g/L蔗糖。

【权利要求4】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：B步骤中所述的共培养基中含有1.8-2.2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、95-105mg/L乙酰丁香酮及18-22g/L蔗糖。

【权利要求5】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：B步骤中所述筛选培养基中含有1.8-2.2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、除草剂4.5-5.5mg/L、240-260mg/L T头孢霉素及28-32g/L蔗糖。

【权利要求6】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：C步骤中所述分化培养基中含有1.8-2.2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、0.08-0.12mg/L 6-苄氨基嘌呤、240-260mg/L T头孢霉素及28-32g/L蔗糖。

【权利要求7】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：C步骤中所述生根培养基中含有240-260mg/L头孢霉素和18-22g/L蔗糖。

【权利要求8】根据权利要求1所述的新型草坪草种质的创制方法，其特征在于：植物组织培养各个阶段的培养条件为：诱导、继代、筛选均为暗培养；分化、芽增殖和生根为光照培养，光强为3800-4200lux、1216h/d。

【权利要求9】如权利要求1-8中任一项所述新型草坪草种质的创制方法制得的草坪草种质。