[发明专利]用于检测戊型肝炎病毒的LAMP扩增用核酸引物组

说明书

相关申请的交互参考：

本申请基于并要求之前于2006年12月26日申请的日本专利申请号2000-350363的优先权，其全部内容在本申请中引入作为参考。

发明背景

1、发明领域

本发明涉及迅速检测戊型肝炎病毒的手段。

2、相关技术的描述

导致戊型肝炎的戊型肝炎病毒(以下也记为“HEV”)是于1990年其基因已被克隆的病毒。HEV在世界局部地区被发现，感染途径以发生水系污染的地区经口感染为主。由此可认为在日本和欧美那样的先进诸国被发现是很稀少的。可是近年来，新的日本固有株的存在变得明朗，认为起因于所述病毒株的肝炎患者也在国内开始被确认(Takahashi K，Iwata K，Watanabe N等人，Viroligy；2001；287；9-12)。由该病毒引起的肝炎病态也存在着从几乎没有症状的轻度的肝炎、至急性肝炎、甚至重症肝炎的症例。因此，有必要迅速鉴定原因病毒，由它的病毒型推测预后，开始恰当的治疗。

另外，据最近的报告确认输血也会感染戊型肝炎病毒(MatsubayashiK，Nagaoka Y，Sakata H等人，Transfusion 2004；44(6)；934-940；Mitsui T，Tsukamoto Y，Yamazaki C等人，J.Med.Virol.2004；74(4)；563-572)。由此，开发能够适应大规模筛选那样的戊型肝炎病毒的简便且高灵敏度的检测法的需求正在增强。

现在，HEV的主要检测法是采用测定患者血清中存在的抗体，或通过PCR扩增基因的方法。然而，在抗体检查中，不仅已治愈的患者被判定为阳性，而且尽管戊型肝炎病毒实际上为阳性时期，但由于抗体产生的时间延迟，往往也被判定为阴性。而通过直接测定病毒基因组的PCR法存在着要从基因组提取开始经历逆转录反应、PCR扩增反应后电泳的步骤而最终艰难获得结果这一烦杂问题。不仅如此，尽管确认了HEV RNA由于菌株不同存在很多变异，但是未必能说使用可一次稳定地检测出它们各种各样的基因型的扩增体系。因此，由于上述原因导致阳性率低也是个问题。

现在，在检测戊型肝炎病毒的检查方法中，适用于健康保险的体系还没有开发。但现实是既使在日本人中，随着年龄增大，抗体阳性率正在上升。鉴于这样现状，感染戊型肝炎病毒的人比已掌握的医疗关系者还多的可能性大。因此，期盼开发简便、灵敏度高、而且费用低的检查体系。

本发明的课题在于提供用于检测戊型肝炎病毒的迅速且正确的手段。

发明概述

为了解决上述课题，本发明者找到了以下的手段。即

(1)用于检测戊型肝炎病毒的LAMP扩增用核酸引物组，上述LAMP扩增用核酸引物组包含FIP引物、F3引物、以及BIP引物和B3引物中的至少一种引物，其中

上述FIP引物为包含序列F1c和序列F2的序列F1c-x-F2(其中，x为0以上的整数个碱基的核酸，序列F1c为序列F1的互补序列)；

上述F3引物为序列F3；

上述BIP引物为包含序列B1c和序列B2的序列B1c-y-B2(其中，y为0以上的整数个碱基的核酸，序列B1c为序列B1的互补序列)；

上述B3引物为序列B3；

上述序列F1、序列F2、序列F3、序列B1、序列B2和序列B3为包含在选自序列编号1～67或其互补序列的至少一个序列中的连续序列所示的15个碱基以上的核酸。

(2)用于检测戊型肝炎病毒的基因型的LAMP扩增用核酸引物组，上述LAMP扩增用核酸引物组包含FIP引物、F3引物、BIP引物和B3引物，其中

上述FIP引物为包含序列F1c和序列F2的序列F1c-x-F2(其中，x为0以上的整数个碱基的核酸，序列F1c为序列F1的互补序列)；

上述F3引物为序列F3；

上述BIP引物为包含序列B1c和序列B2的序列B1c-y-B2(其中，y为0以上的整数个碱基的核酸，序列B1c为序列B1的互补序列)；

上述B3引物为序列B3；

上述引物组中包含的所有序列是为了确定戊型肝炎病毒的基因型，通过使用戊型肝炎病毒基因组的可读框2的部分序列而设计的序列。

本发明提供了用于迅速且正确地检测戊型肝炎病毒的手段。

本发明的优点在以下说明书中示出，一部分从说明书中显然可见，一部分可通过本发明的实践而习得。本发明的优点可通过尤其是下文中指出的手段和组合来实现和获得。

附图简述