[发明专利]一种胸腺素β4的固相合成方法无效
| 申请号： | 200710301301.8 | 申请日： | 2007-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN101412755A | 公开（公告）日： | 2009-04-22 |
| 发明（设计）人： | 赵德中;李新宇 | 申请（专利权）人： | 杭州诺泰制药技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/66 | 分类号： | C07K14/66;C07K14/47;C07K1/04 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 | 代理人： | 徐关寿 |
| 地址： | 310052浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胸腺 相合 成方 | ||
1、一种胸腺素β4的固相合成方法，其特征在于所述方法为：(1)以所述胸腺素β4的肽链自N端连续切分得到的8～12个氨基酸长度的片段D、片段C、片段B、片段A作为固相分段合成目的片段，以王树脂为固相载体，依次进行缩合反应连接保护氨基酸，得到A肽全保护树脂；分别以2-chlorotrityl chlorideresin为固相载体，依次进行缩合反应连接保护氨基酸，得到片段B肽全保护树脂、片段C肽全保护树脂和片段D肽全保护树脂；(2)分别切割片段B肽全保护树脂、片段C肽全保护树脂和片段D肽全保护树脂，得到片段B全保护肽、片段C全保护肽和片段D全保护肽；(3)依次将片段B全保护肽、片段C全保护肽和片段D全保护肽连接至A肽全保护树脂，得到胸腺素β4的全保护肽树脂；(4)用醋酸酐乙酰化胸腺素β4的全保护肽树脂，用三氟乙酸切割树脂，得到粗肽；(5)粗肽溶于5％醋酸水溶液，经C18填料的反相高效液相色谱柱纯化，洗脱、浓缩、干燥，得到所述胸腺素β4。
2、如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：
(1).以王树脂为固相载体，依次进行缩合反应连接如下保护氨基酸：Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，得到A肽全保护树脂：Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gly-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-王树脂；
(2).以2-chlorotrityl chloride resin为固相载体，依次进行缩合反应连接如下保护氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，得到B肽全保护树脂：Fmoc-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-2-chlorotrityl chloride resin全保护树脂；
(3).以2-chlorotrityl chloride resin为固相载体，依次进行缩合反应连接如下保护氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，得到C肽全保护树脂：Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-2-chlorotritylchloride resin全保护树脂；
(4).以2-chlorotrityl chloride resin为固相载体，依次进行缩合反应连接如下保护氨基酸：Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，得到D肽全保护树脂：
Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-2-chlorotrityl chloride resin全保护树脂；
(5).用三氟甲醇、二氯甲烷体积比1：4的混合溶液分别切割B肽全保护树脂，C肽全保护树脂和D肽全保护树脂，分别得到片段B全保护肽：
Fmoc-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-OH，
片段C全保护肽：Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-OH和片段D全保护肽：Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-OH；
(6).以N，N-二异丙基碳二亚胺和1-羟基苯并三氮唑为肽合成缩合剂，依次将片段B全保护肽、片段C全保护肽、片段D全保护肽连接至A肽全保护树脂上，得到胸腺素β4的全保护肽树脂：Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Pro-Asp(OtBu)-Met-Ala-Glu(OtBu)-Ile-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Phe-Asp(OtBu)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Pro-Leu-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Ile-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Ala-Gly-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-王树脂；
(7).用醋酸酐于DMF溶液中乙酰化胸腺素β4的全保护肽树脂，用三氟乙酸切割树脂，得到粗肽；
(8).粗肽溶于5％醋酸水溶液，经C18填料的反相高效液相色谱柱纯化，洗脱、浓缩、干燥，得到所述胸腺素β4。
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