[发明专利]人巨细胞病毒M抗原表位及其在医药研究领域中的应用

说明书

发明领域

本发明涉及人巨细胞病毒外膜糖蛋白中的M抗原表位，以及所述M抗原表位在制备人巨细胞病毒诊断试剂或疫苗中的应用或在其它医药领域中的应用。

发明背景

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)是一类在自然界普遍存在但又具有严格种属特异性的病毒，属β疱疹病毒亚科。人巨细胞病毒在人群中感染非常普遍，但大多数呈临床不显性感染或潜伏感染，多数人在儿童或少年期受HCMV感染后获得免疫。在孕妇，原发或新的HCMV复发感染均可引起新生儿宫内感染或围产期感染，可导致胎儿畸形，智力低下和发育迟缓等，严重者可引起全身性感染综合征，称为巨细胞包涵体病。近20年来，随着免疫低下状态人群包括艾滋病、放射损伤、器官移植和恶性肿瘤等患者的增多，HCMV感染及其引发的严重疾病有日益增加的趋势，这引起了人们对人巨细胞病毒分子生物学、流行病学、诊断技术、治疗与预防等研究的重视。

在巨细胞病毒外层囊膜上含有多种糖蛋白，包括糖蛋白B(gB)、H(gH)、M(gM)/N(gN)、O(gO)/L(gL)等。gB是主要的中和性抗原，gH的作用是辅助膜蛋白B结合细胞膜受体EGFR使病毒完成对细胞的侵袭过程。相对于gB、gH来说，gM研究的文献较少。gM或gM/gN复合物的中和性作用是最近才研究证实。gN的作用一方面与gM构成复合物在病毒感染过程中产生中和性抗体，另一方面与病毒的复制有关。gM是病毒的第三类膜蛋白，分子量约为42-45kDa，经计算机预测gM蛋白含有7个跨膜区段。在病毒外膜上gM与gN形成异源二聚体而存在。尽管其中和性抗原的性质已经得到确认，但到目前为止有关gM的表位研究还未见报道。gM的研究同样具有重要的意义。(JVirol.2006.80(9)：4591-4600).

目前临床诊断HCMV的主要方法是血清学诊断。血清学HCMV诊断主要是检测IgM和(或)IgG。HCMV病毒感染机体首先出现IgM抗体，IgM抗体检测阳性直接说明病毒正处于活动期或繁殖期，它是病毒感染的前期表现，所以IgM抗体检测在临床应用最多；但IgM抗体维持时间很短，从出现到消失仅仅一周左右的时间，如果检测不及时很可能造成病例假阴性结果。IgG抗体尽管出现较晚，其维持时间最长，有时可达几个月的时间。检测HCMV IgG的变化曲线是临床诊断的重要参考依据。在临床上将检测IgM和IgG相结合才能尽量避免假阴性或者假阳性结果。

临床血清学方法检测HCMV试剂主要是商品化的ELISA试剂盒。由于国内试剂盒目前包被的抗原大部分为裂解后的病毒粒子，成分复杂，同一病毒科的成员具有很多相同的成分，所以检测过程中很容易出现假阳性结果，导致临床的误诊；而国外有些试剂盒已经开始包被重组的HCMV特异蛋白或人工合成的多肽，但其成本高，在临床检测过程中增加了患者医疗费用，导致国内临床检测时推广受到限制。

近年来多主张采用重组表达HCMV蛋白及多肽作为检测抗原，已发现具有较高的诊断价值。用重组表达的病毒特异蛋白及多肽作为抗原检测HCMV具有两方面的优势：1)避免了HCMV病毒粒子带来的潜在危险；2)由于抗原是HCMV特异的蛋白或多肽，能够减少假阳性或假阴性结果。[J Clin Microbiol.2005，43(9)：4713-4718]

HCMV疫苗的研究包括亚单位疫苗、质粒载体DNA疫苗、病毒载体DNA疫苗、合成蛋白(肽)疫苗。除了近几年研究的基因工程疫苗以外，还包括已在临床上有限制应用的Towne减毒活疫苗。目前在国外，有的疫苗已完成II期临床试验研究[Clin Infect Dis.2004，39：233-239]，而国内至今没有疫苗进行临床试验的报道，只是对几种病毒成分做了相关实验室研究[军事医学科学院院刊.2003，27(5)：38-41；青岛医学院学报.2003，39(1)：12-15]。

近年来抗原表位肽作为候选疫苗的研究越来越受到广泛的重视，但由于抗原表位肽免疫原性差及免疫佐剂研制的限制，抗原表位肽在临床上的应用研究还处于初级阶段。随着表位肽的研究进展，表位肽作为疫苗的应用具有广阔的前景。因此HCMV特异多肽的发现对提高临床检测HCMV阳性率及预防HCMV感染的实验研究具有重要的意义。

发明内容