[发明专利]一种肠道病毒的免疫荧光层析检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫荧光层析检测试纸，具体地说是一种用于检测肠道常见病毒的免疫荧光层析检测试纸条，可检测的肠道病毒包括诺瓦克病毒、肠道腺病毒、星状病毒和轮状病毒，该试纸可用于流行病监测、临床检验等相关领域。

背景技术

免疫层析方法是以胶体金、荧光素、酶等作为标记物，利用特异性抗原抗体反应和标记物的特性，对抗原或抗体物质进行定位、定性乃至定量研究的标记技术。自Faulk与Taylor在1971年创立胶体金标记技术以来，Geoghegan_1应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原，建立了光镜水平的免疫金技术(IGS)。Danscher在此基础上改进并发展了用银显影液增强光镜金颗粒可见性的免疫金染色法(IGSS)。Holgate也对此法进行了改进。近年来，胶体金技术亦被引入免疫化学检验领域，称为金标记免疫吸附试验(gold labeledimmunosorbent assay，GLISA)。由于胶体金作为标记物时，其试纸条的操作简便，不需要借助较复杂的监测仪器等优越性，因而在免疫组织化学检测中受到了广泛的重视和应用，但一般情况下其检测灵敏度较低。以酶类(生物素酶、碱性磷酸酶等)作为标记物时，涉及加样、温浴、洗涤、显色、终止等多个步骤，耗时较长，对操作人员和环境的要求较高；以荧光素作为标记物时，借助荧光检测仪可以一定程度上提高检测的灵敏度。

在免疫层析方法中，为进一步提高灵敏度，已有将荧光素作为标记物的报道。应用荧光素作为标记物，以荧光检测仪作为检测仪器，理论上可以提高其检测的灵敏度。

腹泻是人类尤其是儿童、老人及免疫缺陷者的一种常见病和多发病，其中病毒性腹泻占70％～80％，是导致儿童死亡的重要原因。其中轮状病毒(Rotavirus，RV)、星状病毒(Astrovirus，AstV)、诺瓦克病毒(Norwalk virus，NV)及肠道腺病毒(Enteric Adenovirus，EAdV)等四种肠道病毒最为常见，3岁前几乎所有儿童都经历过上述腹泻病毒的感染。

轮状病毒引起的腹泻是病毒性腹泻的主要因素，40％-60％的腹泻由轮状病毒引起，全球每年约有1.4亿人发生轮状病毒腹泻，其发病率和严重程度居秋冬季腹泻的首位，并导致大约80万儿童死亡，严重的轮状病毒感染主要见于6～24个月婴幼儿。肠道腺病毒也是病毒性腹泻的重要病原，主要症状为腹泻，水样便或稀便，腹泻次数较多，病程7～14天，排毒时间10～14天，可伴有发热，呕吐和呼吸道症状，病情相对较轻，少数也能导致严重脱水致死。星状病毒与轮状病毒相似，以2岁以下儿童多发，可以散发，也可以暴发流行。诺瓦克病毒分布广泛，可导致成人和儿童的急性腹泻的病毒，是除轮状病毒外引起腹泻的最主要的病毒病原，日本的流行病学调查显示诺瓦克病毒感染率已超过轮状病毒。在美国，成人非细菌性胃肠炎的爆发中有42％由该类病毒所引起，我国还缺乏流行病学调查。

目前临床上仍无针对这四种肠道病毒的特效治疗药物，虽然有轮状病毒疫苗研制的报道，但其效果还需要观察，所以预防、控制病毒传染显得尤为重要。细菌、寄生虫及食物中毒等原因也能引起腹泻，临床症状相仿，但与病毒性腹泻的治疗方案不一样。有报道发现双重病毒或多种病毒感染的腹泻，其症状更严重，病情进展快，导致死亡的风险更高。

由于肠道传染病的临床表现和常用的辅助检查缺乏明显的特异性，因此存在着在疾病早期病原体诊断不明确的危险因素，从而存在着疾病早期滥用抗生素、生病期延长而增加患者痛苦和经济负担的客观因素。因此，对此类疾病的深入研究，研制快速准确的诊断技术，对预防疾病的发生和减少死亡率，指导临床对症治疗和避免抗生素滥用有重要意义。

应用高灵敏度的、快速和特异的免疫荧光层析方法进行肠道传染病的病原学诊断，有利于在疾病症状出现的早期就确定引起肠道传染病的病原体。有利于在疾病早期针对性进行有效的抗生素治疗，缩短疾病的病程，减轻患者的痛苦和经济负担。对肠道病毒及时而准确的病原学诊断，有利于对肠道病毒的流行病学进行研究，指导在疾病流行的初期进行预防，从而能极大程度的降低肠道传染病的流行范围和程度，降低肠道传染病对社会的危害。